修整补充实验讲义.doc

《现代工业微生物学实验技术》补充讲义 华南理工大学生物科学与工程学院 张 毅 林晓珊 华南理工大学教材供应中心 2009年3月实验一 培养基的制备和灭菌 （玻璃器皿的包扎） 请同学们预习《现代工业微生物学实验技术》P1～24 培养基的制备和灭菌旨在学习各种培养基的制备方法，包括培养基的配制，包扎及灭菌技术。 为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净。保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管、三角瓶等精心妥善包扎。这些工作看来很普通简单，如操作不当或不按规定要求去做，会导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。 使玻璃器皿达到无菌状态叫灭菌。灭菌和消毒是二个不同含义的名词。消毒是指消灭病原菌或有害微生物，而灭菌则是杀死或消灭一定环境中的所有微生物。消毒与灭菌的方法很多，但总的可分为物理法与化学法两大类。物理法包括加热灭菌（干热灭菌与湿热灭菌），过滤灭菌、紫外线灭菌等。化学方法主要是利用有机或无机的化学药品对实验室用具和其它物体表面进行灭菌与消毒。在实验室里用得最多的加热灭菌法是高压蒸汽灭菌和干热灭菌。一般培养基和灭菌水等用高压蒸汽灭菌，而玻璃器皿常用干热灭菌目的都是使细菌体内蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 ???? 在同一温度下，湿热杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固，同时湿热穿透力强，而且当蒸汽与被灭菌物体接触凝成水分时，又可放出热量，使温度迅速增高，从而增加灭菌效力。 培养皿：12套（ф9cm） 吸管：3支（1ml） 三角瓶：2个（250ml） 三角玻扒：3支 2.各组包扎所需工具 剪刀：1把 铁丝：数支 标签贴纸：1张 油性笔：1支 牛皮纸：各式 棉绳：各式 所需仪器设备： 高压蒸汽消毒器（杀菌锅）(8) 电热鼓风烘箱(1) 二. 实验内容： （一）玻璃器皿包扎 1．培养皿：洗净烘干后以牛皮纸密密包紧，一般以6套做一包，外面用绳子捆扎，以免散开，然后待灭菌。使用时在无菌室中才打开取出培养皿。 2．吸管：在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑），棉花不宜露在吸管口的外面。然后分别将每支吸管尖端斜放在牛皮纸条的的近左端，与报纸约呈60o角，并将右端多余的纸打一小结，不使散开，标上容量。若干支吸管扎成一束，待灭菌。使用时在无菌室中才打开。 脱脂棉花是以防止菌体误吸口中，及口中的微生物吹入吸管而进入培养物中造成污染。 3．试管和三角瓶：试管和三角瓶都要做合适的棉花塞。棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。棉塞的制作要求使棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过紧也不能过松。过紧易挤破管口和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口。 若干支试管用绳扎在一起，在棉花塞部分外包裹牛皮纸，再在纸外用绳扎紧。 三角瓶每个单独用牛皮纸包扎棉塞。 棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管和三角瓶。 4．三角玻扒和玻棒：跟包扎吸管相似，将三角部分斜放在牛皮纸条的近左端，与纸约呈45o角，并将右端多余的纸打一小结。 包扎好的玻璃器皿，请交到侧边实验台，老师检查登记，再灭菌。 （二）玻璃器皿灭菌（空消）分成两大组，由两位老师指导。 培养皿、吸管和三角扒用高压蒸汽灭菌（由同学负责，对面两组共用一锅） 试管和三角瓶用干热灭菌。（由老师负责） 每组同学自行灭菌，练习消毒器的使用 三． 清理工作 1． 各组各自完成： 清洁整理台面，将凳子收回台底。 请各组按清单检查柜中物品，如有短缺请及时向组长汇报登记。 2．值日生工作： 检查整理，台面，地板檫干净，垃圾袋扎好放在门口，更换新垃圾袋。 为下班实验课提供必须物品。 四．实验报告： 思考题： 试管口、吸管口的棉花塞和三角瓶口的纱布有什么作用？覆盖的防潮纸又是什么作用？ 进行高压蒸汽灭菌操作应注意哪些事项？可能导致灭菌不完全的因素有哪些？ 干热灭菌完毕后，在什么情况下才可开箱取物？为什么？ 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、无机盐、生长因子以及水分等。微生物在培养基上生长繁殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力，因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。培养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成可分合成培养基和天然培养基。按其物理状态可分固体培养基，液体培养基和半固体培养基。按其特殊用途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。 ????培养基配制后还必须进行灭菌。 调pH酸碱液：1套 pH试纸：1包 3．仪器设备： （1）电炉（8） （2）电子天平（8） (3 )手提式蒸汽消毒器（8） (4 )酸度计