总花色苷含量测定.docVIP

总花色苷含量测定—分光光度法 1、综合国内外资料,主要有以下几种计算吸光值A 的方法[1]: (1) 当叶绿素是该样品中主要存在的干扰色素时,需消除叶绿素吸收含量的影响;此时,计算公式为: A = (Amax - A620) - 0.1(A650 - A620) (2) 含有其它干扰物质时花色苷总量的测定: a) 直接法:在新鲜的植物提取物中,因为很少含有在花色苷的最大吸收区发生吸收的干扰物质,花色苷总量可以直接由可见区最大吸收波长处的吸光度来测定。 计算公式为: A = Amax 　 直接法吸收光谱测定:用××分光光度计于250 - 800nm 下全波长扫描,得到花色苷在0.1 % 盐酸—80 % 乙醇中的可见光区最大吸收波长,在此最大波长下测定各样品的吸光值A 。 b) pH 示差法:在加工或储藏过程中,会产生褐色降解物,这些降解物和花色苷具有相同的能量吸收范围。这类花色苷总量的测定,通常用pH示差法[8] 。 计算公式为: A = (Amax - A700) pH1.0 - (Amax - A700) pH4.5 　 pH 示差法吸收光谱测定:先确定合适的稀释因子,使样品在λmax下的吸光度在分光光度计的线性范围内;然后制备两个样品稀释液,其中一个用氯化钾缓冲液(0.025M,pH1.0) 稀释,另一个用醋酸钠缓冲液(0.4M,pH4.5) 稀释,将稀释液平衡15min 后,用蒸馏水做空白,分别测定两种样品稀释液在λmax和700nm处的吸光值A。 2、花色苷总含量的测定[2]：通过波长扫描,确定××花色苷在可见区的最大吸收波长为λmax。利用花色苷的结构特性,当pH为1.0时在λmax处有最大吸收峰,而当pH为4.5时,花色苷转变为无色查尔酮形式,在λmax处无吸收峰,用示差法计算溶液中总花色苷含量。 计算公式为: C (mg/ g) = (A0 - A1) ×V ×n ×M / (ε×m ) 式中: A0 、A1 —分别为pH1.0、pH4.5时花色苷在λmax处的吸光值 V —提取液总体积(mL ) n —稀释倍数 M —cy-3-glu (矢车菊- 3-葡萄糖苷)的相对分子质量(449.4) ε—cy-3-glu的消光系数( 29600) m —样品质量( g) 3、花色苷含量TAcy的计算公式为(以天竺葵色素-3-葡萄糖苷计)[3] : TAcy (mg/ hg) =(A ×433 ×10 ×V）÷(22 400 ×m)×100 　　 A = (OD500nm - OD700nm) pH1.0 - (OD500nm -OD700nm) pH4.5 式中: V — 提取液的总体积(mL) m — 取样量(g) 22 400 —天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数 433 — 天竺葵色素-3-葡萄糖苷的摩尔分子量。 4、花色苷含量测定[4] 样品处理: 将各品种的干燥样品粉碎(40目)后,准确称取0.5 g用10 mL 65%的酸性乙醇提取24 h,提取3次,然后将3次提取液混合抽滤,真空旋转挥发回收乙醇,用蒸馏水定容到100 mL,摇匀,静止备用。 测定方法:含量测定用pH示差法,按照下面公式计算,测定3 次取其平均值。 C(mg/L ) = (OD ×M ×DF ×1000)/ α×1 式中: OD 为吸光度, DF为稀释倍数,M 为分子量,α=26900。 花色苷[5]：将提取液稀释合适倍数，用1cm 比色杯测其吸光值，参照Fuleki[6]的计算方法转换成总花色苷浓度，公式如下： C/(mg/mL)=(A×MW × DF × 1000)/(ε×1) 式中：A为吸光值；MW 为分子量（以矢车菊素-3-葡萄糖苷为标准[7]，449.4）； DF为稀释倍数；ε为消光系数，26900 L.cm-1.mg-1。 参考文献 [1] 霍琳琳,苏平,吕英华, 分光光度法测定桑葚总花色苷含量的研究[J]. 酿酒, 2005 年7月,第32卷第4期. [2] 李颖畅,孟宪军,张琦,于娜，蓝莓果主要物质含量及处理方式对其花色苷的影响[J]. 食品工业科技, Vol. 29, N o. 05, 2008. [3] 盛小娜,王璋, 不同预处理方式对速冻草莓花色苷含量的影响[J]. 冷饮与速冻食品工业, 2006年12月第12 卷第4期. [4] 王振江,肖更生，廖森泰等，不同品种桑椹的抗氧化作用与其花色苷含量的相关性研究[J]. 蚕业科学，　2006，32(3). [5] 吕英华，苏平，那宇，李辉, 桑椹色素体外抗氧化能力研究[J]. 浙江大学学报(农业与生命科学版) 33(1)：102～107，200 [6] Fuleki T， Francis F J． Quant