魔芋硫酸多糖抗病毒要点分析.ppt

第一部分 硫酸多糖抗病毒研究综述 硫酸化多糖的抗病毒生物活性 硫酸化多糖抗病毒构效关系 硫酸化多糖抗病毒作用机理 硫酸化多糖抗病毒临床应用 3.3 抑制病毒复制、表达 第二部分 魔芋硫酸多糖抗病毒作用特性及机理研究 制备及分离纯化 结构表征 对RNA病毒CVB3侵染及PV1复制的抑制作用研究 对DNA病毒HBV胞内表达的抑制作用研究 抗RNA病毒IAV的血凝效价及作用机理研究 1、717阴离子树脂离子交换层析图 2、 HOGS糖酯和硫酸基含量测定 1、葡聚糖凝胶层析鉴定 2、醋酸纤维素薄膜电泳鉴定 3、高效液相色谱鉴定 HOGS及相关物质的含量 HOGS对HBV-DNA的抑制作用 HOGS对HBV-DNA复制和释放均具有一定抑制作用，且对胞内DNA复制的抑制效果更显著。 四、小结 乙肝病毒（HBV） HOGS对细胞培养上清中分泌的HBV抗原有较强的抑制作用，且均表现出对分泌HBsAg的抑制率高于对HBeAg的抑制率。具体机理有待进一步研究。 HOGS对HBV-DNA在胞内的复制和释放到胞外均具有一定抑制作用，且对胞内DNA复制的抑制效果更显著。提示它对HBV前基因组3.5kbRNA的逆转录有一定抑制作用。 第五章 HOGS抗RNA病毒IAV的血凝效价及作用机理研究 甲型流感病毒(IAV) 正粘病毒科单股负链RNA病毒，转录和复制均在被感染细胞的核内完成。 蛋白质血凝素（haemagglutinin，HA） 神经氨酸酶（neuraminidase，NA) 一、HOGS的MDCK细胞毒性 MDCK细胞病变结果 0.5mg/mL以下浓度时，细胞病变率在50%以下，HOGS对细胞基本无毒性，其最大无毒浓度为0.5mg/mL。 72h的吸光度值及细胞相对增殖率 HOGS在浓度为0.5mg/mL以下时均无明显细胞毒性作用，毒性等级为1～2级；TC50为0.768±0.004mg/mL。 四、HOGS激光拉曼光谱分析 HOG激光拉曼光谱图 HOGS激光拉曼光谱图 Cm -1 580㎝ 处出现一新峰，表明有部分醚键以R-O-CH2-O-R形式存在。HOGS在1364㎝，1252㎝，580㎝ 处-SO2-O特征吸收峰略有加强，826㎝ 处出现的一个新峰为S=O伸缩振动，充分表明已连接硫酸基团。 HOG和HOGS的激光拉曼光谱吸收峰归属 -1 -1 -1 -1 -1 五、HOGS的X射线光电子能谱分析 HOG的XPS谱图 纯化前HOGS的XPS谱图 HOGS纯品的XPS谱图 HOG的C元素相对含量为70.41%，O元素相对含量为29.59%；HOGS的C元素相对含量为49.75%，O元素相对含量为42.31%，S元素相对含量为7.94%。纯化前HOGS的S元素相对含量为41.21%；HOGS纯品的 S元素相对含量为58.79%。数据和图谱分析表明，纯化后HOG上引入的S元素含量提高了约40%。 综合C、O、S三元素的谱图，并对S2P进行曲线拟合，根据结合能数据分析，对于S原子仅可能以-OSO3-/SO3H形式存在，进一步说明HOG被修饰为硫酸酯。 碳元素的XPS谱图 氧元素的XPS谱图 硫元素的XPS谱图 六、氢核磁共振波谱( H-NMR)分析 1 HOG的 H-NMR谱图 HOGS的 H-NMR谱图 1 1 ppm ppm 第三章 HOGS对RNA病毒CVB3侵染及PV1复制的抑制作用 柯萨奇病毒B（CVB） 小核糖核酸病毒科的人类肠道病毒，引起病毒性心肌炎主要的病原体。 脊髓灰质炎病毒（PV） 小核糖核酸类病毒，脊髓灰质炎的致病因子。 一、HOGS的Hela、Vero细胞毒性 正常细胞 病变细胞 不同浓度HOGS对Hela细胞CPE的影响 注：“-”表示细胞存活率1/4以下、“+”表示细胞存活率1/4～1/2、“++”表示细胞存活率1/2～3/4、“+++”表示细胞存活率3/4以上。 72h后的吸光度值及细胞相对增殖率 对于Hela细胞，HOGS的半数中毒浓度TC50为0.667±0.006mg/mL 不同浓度HOGS对Vero细胞CPE的影响 细胞的吸光度值 细胞相对增殖率及毒性分级 对于Vero细胞，HOGS的半数中毒浓