专题课题土壤中分解尿素的细菌的分离和计数.要点.ppt

（一）筛选菌株 提出的问题 —如何寻找耐高温的酶？ 解决问题的思路 —寻找高温环境； 原理 —高温淘汰其他菌，选出耐高温细菌， 从耐高温菌种中提取耐高温酶。 实验的具体操作 ㈠.土壤取样 从肥沃、接近中性的潮湿土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基 制备牛肉膏蛋白胨培养基 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 （对照作用） 思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？ ㈡.制备培养基： 每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 （三）样品的稀释 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。 ㈣.涂布平板 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度和时间 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征。 菌落 菌落 [一]无菌操作 1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。 [三]制定计划 三、操作提示 四、结果分析与评价 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落？ 对照的培养皿无菌落说明培养基没有污染。 牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 四、结果分析与评价 2.获得某一稀释度下，菌落数30～300的平板，在这一稀释度下是否至少有两个平板的菌落数相接近？ 相接近，则说明操作成功。并能够进行菌落的计数。 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的 细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果 接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？ 如果选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。应舍弃该数据，不进行计算。 五、鉴定：筛选后必鉴定 鉴别培养基：不影响微生物的生存 1、酚红培养基： 鉴定分解尿素的细菌。 原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性 2、伊红—美蓝培养基： 鉴定大肠杆菌。 原理：代谢产物与伊红—美蓝结合→菌落呈黑色并带有金属光泽。 （一）空气中微生物总数的检测 （二）水中细菌总数的检测 （三）牛奶中细菌的分离与计数 （四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数 巩固练习 1.使用选择培养基的目的是（ 　） A.培养细菌　　 B.培养真菌　　 C.使需要的微生物大量繁殖 D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别 2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( ) A.CO2和N2 B.葡萄糖和NH3　　 C.CO2和尿素 D.葡萄糖和尿素 C D 3.下列说法不正确的是（ 　） A.科学家从