猪瘟病毒蛋白与功能要点.ppt

猪瘟病毒蛋白的结构与功能 主要内容 猪瘟和猪瘟病毒 猪瘟病毒的结构蛋白和非结构蛋白 参与病毒穿入和吸附的蛋白及其细胞受体 病毒复制相关蛋白 宿主细胞嗜性相关蛋白 病毒毒力相关蛋白 免疫应答相关蛋白 与宿主相互作用的病毒蛋白 问题和展望 猪瘟 猪瘟（classical swine fever, CSF）是猪瘟病毒引起的急性、发热性、出血性、高度致死性传染病，死亡率高达80-90%。 世界动物卫生组织（OIE）将猪瘟列入须申报动物疫病名录（ OIE-listed, notifiable disease），我国将其列为一类传染病。 可呈急性、亚急性或慢性经过。 猪瘟病毒 猪瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）属于黄病毒科（Flaviviridae）瘟病毒属（Pestivirus）成员。 单股正链RNA病毒。 与BVDV和BDV有血清学交叉反应性。 猪瘟病毒 病毒核酸为RNA，含有唯一ORF，编码一多聚蛋白。 二十面体对称，有囊膜，直径34-35 nm。 病毒抵抗力不强，一般5-10%石灰乳、2-3%氢氧化钠、5%漂白粉可杀死病毒。 猪瘟病毒编码蛋白 多聚蛋白裂解为4个结构蛋白和7个非结构蛋白。 结构蛋白（C、Erns、E1、E2）。 非结构蛋白（Npro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B）。 猪瘟病毒结构蛋白 猪瘟病毒非结构蛋白 参与病毒穿入和吸附的蛋白及其细胞受体 猪瘟病毒感染细胞是通过外膜糖蛋白Erns和E2与细胞表面蛋白的相互作用介导的。 Erns与细胞表面受体硫酸乙酰肝素（HS）作用，帮助病毒吸附细胞表面（Hulst et al, 2009）。 猪瘟病毒的E2受体未见报道，我们小组初步证明宿主细胞蛋白CDx与E2蛋白之间存在相互作用，可能是E2的一个受体。 CSFV 病毒蛋白受体将是CSFV研究的一个热点。 病毒复制相关蛋白 CSFV NS5B蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶活性（RdRp）（Xiao et al，2002）。 CSFV的复制起始于NS5B蛋白结合病毒的3?-NCR，从而起始病毒RNA的复制（Steffens et al，1999）。 NS5A以及NS4B与NS5B蛋白能形成高度有序的复制酶复合体，共同对CSFV的复制起作用（Sheng et al，2010）。 NS3蛋白的RNA解旋酶活性能够提高病毒的翻译（Xiao et al，2008）。 病毒复制相关蛋白-假说A 病毒复制相关蛋白-假说B 病毒复制相关蛋白 目前关于CSFV的复制过程仍不清晰，参与病毒复制的蛋白及其在病毒复制过程中的作用仍需要进一步深入研究。 宿主细胞嗜性相关蛋白 有研究者用CSFV的E2基因替换BVDV的E2基因，拯救的嵌合BVDV能够感染PK-15细胞，并且在PK-15细胞中培养病毒能够达到较高滴度（Reimann et al，2004）。因此，E2蛋白可能是CSFV细胞嗜性的主要决定因素。 糖基化蛋白Erns和E1是否对CSFV的细胞嗜性有影响有待研究。 病毒毒力相关蛋白-结构蛋白 病毒毒力相关蛋白-非结构蛋白 诱导免疫应答相关蛋白-结构蛋白E2 CSFV糖蛋白中E2是最主要的免疫原性蛋白，其能够诱导机体产生中和抗体并且能够保护CSFV强毒的攻击。 E2的抗原位点主要分布在N 端690-866 位氨基酸残基上，分为4 个抗原区：A、B、C 和D 区，分别位于766-865、690-799、690-799和775-788位氨基酸残基之间。 693-716肽段可提供免疫保护（Dong et al，2006）。 目前报道的E2蛋白抗原表位主要位于775-865和775-812。 E2单克隆抗体WH303识别一个在CSFV 中高度保守的表位，其表位829TAVSPTTLR837（Lin et al，2000）。 我们小组鉴定771LLFDGTNP778为一保守的线性抗原表位（Peng et al，2008）。 诱导免疫应答相关蛋白-结构蛋白Erns Erns蛋白也可诱导中和抗体，针对Erns蛋白的抗体能够提供对猪瘟的部分保护作用。 研究表明，Erns的抗原位点位于332-412位、351-427位和376-487位氨基酸残基中（Lin et al, 2004）。 研究发现，Erns 376-412位和376-427 位氨基酸残基为构像依赖型表位，可识别CSFV感染后所出现的抗体（Lin et al, 2005）。 用随机肽库技术在Erns鉴定了中和性抗原表位，分别位于384-386及322-323位、380-386 位氨基酸区域（Zhang et al, 2006）。 诱导免疫应答相关蛋白-非结构蛋白 非结构蛋白NS2-3能够诱导抗体的产生，具有CSFV特异性