《二元手性选择体系毛细管电泳分离检测未衍生化氨基酸对映体》.ppt

二元手性选择体系毛细管电泳分离检测未衍生化氨基酸对映体的研究 姓名：陈裕富 专业：应用化学A 导师：谢天尧 副教授 一、前言 毛细管电泳的分离模式： 毛细管电泳的检测技术： 2.氨基酸手性分离的研究进展 高效液相色谱法 （HPLC） 毛细管电泳在氨基酸对映体分离检测中的应用 间接拆分法（手性消除） 直接拆分法 配体交换法 是分离手性氨基酸的一种最早的方法，通常指中心离子和L型氨基酸或是缩二氨酸形成螯合物做手性选择剂，利用对映体和螯合物形成不同不对称物的稳定性和光学结构的差异而达到分离。 中心金属离子一般是Cu2＋, Zn2＋, Ni2＋, Mn2＋, Co2＋等，其中Cu2＋最为常用、有效。 3.苯丙氨酸(Phe)对映体研究进展 4.研究背景及意义 Fig.2 CES2003型毛细管电泳仪器示意图 二、实验及讨论 2.3 实验结果与讨论 2.3.2 铜和L-赖氨酸络合物配比和浓度对分离度的影响 2.3.4 缓冲溶液的组成、浓度及pH的影响 2.3.5 进样方式的选择 2.3.6 分离电压的选择 2.3.7 线性范围、检出限和精密度 2.4 拆分机理初步探讨 三 、结论 四 、致谢 * * 目录 前言 实验与 讨论 结论 致谢 1.毛细管电泳技术的介绍 毛细管电泳（Capillary Electrophesis, CE）是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现高效、快速分离的电泳分离分析方法。 特点：快速、低耗、简便、高效环境友好、经济、自动、洁净 毛细管区带电泳(CZE） 胶束电动毛细管色谱（MECC） 毛细管凝胶电泳（CGE） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管等速电泳（CITP） 毛细管电色谱（CEC） 其他模式 (ACE、 CAE、CCE) 紫外检测（UV） 激光诱导荧光检测器 （LIF） 质谱检测器（MS） 电化学检测器（EC）:电导检测、电位检测、安培检测 化学发光检测器（CL） 氨基酸是组成生物机体蛋白质的基本成分，是构建细胞、修复组织的基础材料。 氨基酸分子结构中含有不对称的碳原子，属于手性分子。非天然的氨基酸多为外消旋体，D型氨基酸一般不能为生物所利用，必须在体内转化为L型才能被吸收。 手性氨基酸的分离分析，在蛋白质的研究、医药、食品、卫生等领域具有重要意义，是分析化学研究中的热点和难点之一。 氨基酸对映体分离的方法 高效毛细管电泳 （HPCE） 优点：灵敏、快速、分辨率高、重复性好、样品分析量大等 缺点：操作复杂费时，制备的手 性色谱柱费用昂贵。 优点：分离效率高，分析速度快，操作简单，运行成本低，对环境造成的污染小，具有独特的优势，是氨基酸一种理想的分离方法 缺点：制备能力差些 主客体络合 配体交换络合 手性胶束包合 蛋白质亲合 苯丙氨酸(Phe)是一种重要的氨基酸，主要用作试剂及医药上的胃肠外营养输液，亦见用作特殊人员合成膳食、必需氨基酸片等营养强化剂的成分；还可作为昆虫人工饲料的成分；对治疗苹果疱茄病亦有效。 L-苯丙氨酸是人和动物所需要的 一种氨基酸，而D-苯丙氨酸是生产 艾滋病病毒抑制剂的重要中间体。 Fig. 1 The structure of Phenylalanine(pI = 5.48) 苯丙氨酸对映体的拆分方法： 手性膜法、薄层色谱、离子色谱法、高效液相色谱和毛细管电泳等 J.Chromatogr.A,2002,945:249-255 紫外检测 Cu2++ L-Lys 胶束电动毛细管色谱 (MECC) 直接拆分 J.Chromatogr.A,2000,874:285-292 紫外检测 Cu2++ L-Pro 非水毛细管电泳(NACE) 直接拆分 Anal.Chim.Aca 523(2004) 1-7 紫外检测 Cu2++ L-Pro 胶束电动毛细管色谱 (MECC) 间接拆分 Electrophoresis. 1999,20: 1842-1845 紫外检测 Cu2++L-Arg 区带电泳（CZE） 间接拆分 参考文献 检测方法 手性选择剂 拆分模式 拆分原理 表1毛细管电泳拆分氨基酸对映体的比较 目前所采用的检测方法通常以光学检测（紫外和荧光）为主，由于大部分氨基酸都缺乏光学活性，需进行柱前或柱后衍生化处理才能检测，操作费时繁琐，且易引入新的误差 。 电化学检测作为一种灵敏度高、选择性好的检测方法在毛细管电泳分离分析中已经得到广泛的应用，其中电导检测法具有通用性，氨基酸无须经过衍生即可检测，操作简单方便。 本论文利用本课题组研