《结核菌培养》.doc

结核菌培养 标准化操作及质量保证手册 国家结核病参比实验室 2010年3月 前 言 中华人民共和国卫生部行业标准－肺结核诊断标准于2008年出版，其中规定了肺结核诊断依据，在实验室检查部分中阐述了痰涂片检查及结核菌分离培养是常用两种检查方法，培养也作为结核病细菌学诊断的方法之一。 随着中国结核病控制规划（NTP）工作不断深入，耐药结核病已成为工作重点之一。这对实验室工作提出了新的要求，单纯依靠基本DOTS策略中痰涂片显微镜检查（涂片镜检）不能满足工作要求，而且结核菌培养是目前实验室耐药性诊断的前提和重要疗效评价方法,而我国结核病实验室结核菌培养检查仍处于良莠不齐，规范操作显得尤为迫切，为此，国家结核病参比室组织专家编写了这本结核菌培养标准化操作手册。 编写本手册的目的是希望从事结核病实验室检查的相关人员按照本手册要求进行相关操作，以达到既能保障试验结果的可信性，同时又可以保护实验室人员自身安全。 本手册大部分内容参考了WHO标准化操作程序资料，另外也参考了中华医学会结核病学分会的结核病实验室诊断规程、中国防痨协会结核病细菌学检验规程、中国结核病控制规划指南等资料，经过卫生部结核病专家咨询委员会细菌学专家、部分省级结核病参比实验室专家讨论，从基层人员操作实用性角度出发，阐述了分枝杆菌培养的各个过程的操作程序，包括生物安全、标本收集储存和运输、标本处理、标本接种、孵育、结果判读和解释、废弃物处理、相关仪器的使用方法和注意事项等。 本手册供开展结核菌培养的实验室在实际工作中遵照使用。 梅里埃基金会和第七轮全球基金为本手册的制定和修订提供了支持,世界卫生组织驻华代表处、黑龙江省结核病防治所、哈尔滨市结核病防治所为本手册试点提供了支持,辽宁省、江苏省结核病参比实验室为本手册问卷调查提供了支持。 编者 2010年3月  目 录 概 述 7 第一章 结核菌培养的生物安全要求 8 第一节 实验室设施基本要求 8 第二节 实验室基本设备及耗材 9 第三节 实验室生物安全管理 9 第四节 个人防护操作程序 11 一、防护服 11 二、鞋套/工作鞋 12 三、呼吸防护用具 13 四、手套 15 五、帽子 16 六、手卫生 16 第五节 废弃物处理 17 第二章 培养操作程序 18 第一节 改良罗氏培养基制备与储存 18 一、设备与材料 18 二、试剂与含量 18 三、培养基制备程序 19 四、培养基制备注意事项 20 五、储存和运输 20 第二节 标本收集、储存和运输 21 一、标本收集 21 二、标本储存与运输 25 第三节 痰标本中结核菌的分离培养 26 一、简单法 26 二、离心法 29 三、培养注意事项 30 第四节 其他标本的结核菌培养 30 第五节 废弃物处理 31 第六节 菌株的短时保存和运送 32 一、保存条件 32 二、菌株保存的安全管理 32 三、菌株运送 32 第三章 培养质量保证 33 第一节 实验室网络及职能 33 一、结核菌培养实验室网络 33 二、结核菌培养质量保证体系中各级实验室职能 33 第二节 室内质量控制 35 一、改良罗氏培养基的实验室内部质量控制 35 二、标本收集与保存运送接收 37 三、痰标本处理 37 四、孵育 37 五、判读结果 38 六、登记和报告结果 38 七、监测与分析 38 第三节 室间质量评估 39 一、现场评价 40 二、培养基的敏感性测试和无菌性测试 42 第四章 菌种初步鉴定 43 第五章 仪器的使用 45 第一节 生物安全柜 45 一、简述 45 二、安装 45 三、使用 45 四、安全注意事项 46 五、甲醛熏蒸消毒 46 第二节 恒温培养箱 47 一、简述 47 二、采购与安装 47 三、使用步骤和注意事项 47 四、质量控制和温度监测 47 五、校正 47 六、维护 48 第三节 离心机 48 一、基本要求 48 二、使用步骤 48 三、质量控制和维护 49 四、污染事故处理 49 第四节 蒸汽凝固器 50 一、基本要求 50 二、使用步骤 50 三、清洁 50 四、注意事项 50 第五节 天平 51 一、基本要求 51 二、操作程序 51 三、维护 51 第七节 高压灭菌器 52 一、简述 52 二、定义和缩写 52 三、应用范围 52 四、安装 53 五、适宜进行高压灭菌的物品 53 六、指示试剂 53 参考文献 56 附件1 磷酸盐缓冲液配制方法 56 附件2 液体培养法 56 一、试剂 56 二、前处理、接种步骤 57 三、孵育 57 四、结果判读和报告 57 附件3 可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输管理规定 58 附件4 人间传染的病原微生物名录（节选） 卫生部 2006 61 附件5 实验室培养登