USP29-61微生物限度检查中文教程分析.doc

61 微生物限度检查 本章所提供的检测程序用于测定包括原料药及制剂在内的各种药品中需氧菌数量以及不含有指定的微生物。 如果已有充分的证据证明某种自动化的方法可以给出与本章所提供的方法等效的或更好的实验结果，可以用该方法替代本章所提供的方法。在实验准备以及实施的过程中，应遵守无菌操作。除另有规定外，本检查法中“孵育”是指 将容器置于温度控制在30-35?C的空气中24-48小时。术语“生长”在此处是专用于表示存活的微生物的增殖。 预试验（验证试验） 应有充分的证据证明在实验条件下检品本身对可能存在微生物的增殖无抑制作用，这在很大程度上决定了下述所规定的检查方法的结果有效性。因此，应进行预试验，测定金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及沙门氏菌分别接种到稀释的检品中共同培养后的存活情况，以使检查标准化并作为随后试验的具体要求。方法如下：接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及沙门氏菌的24小时肉汤培养物（稀释度大于等于10-3）至最低稀释级样品供试液中（样品用pH 7.2磷酸盐缓冲液, 大豆-酪蛋白水解物琼脂培养基或乳糖液体培养基稀释），若微生物在相应的培养基中不能生长，则该部分试验无效，有必要按下述步骤对实验进行调整：通过（1），增加稀释剂的体积，供试品量保持不变，或（2）在稀释剂中加入足够量的灭活剂；或（3）适当地将（1）和（2）结合使接种物可以生长。 可在培养基中加入0.5%的大豆卵磷脂和4.0%的聚山梨酸酯-20以中和供试品中的所存在的抑菌成分。或者用酪蛋白水解物-大豆卵磷脂-聚山梨酸酯-20-培养基按前述方法重复试验以确认对供试品中的保护剂或其他抗菌剂的中和作用。若产品中含有抑菌成分，而该产品又是可溶的，可采用无菌检查项下产品的无菌检查法中的薄膜过滤法。 如果在加入灭活剂或大大增加稀释剂的体积后仍不能使上述培养物恢复存活，而且该产品不适合采用薄膜过滤法，可以作如下推断：所接种微生物的分离培养失败是由于该产品的抑菌活性。此信息表明该产品未被指定（上述给定）的微生物所污染（此信息表明该产品大概不会被上述给定的微生物所污染）。应继续进行监测以建立该产品的抑菌谱和杀菌活性范围。 缓冲液和培养基 培养基既可以按以下处方配制，也可以使用生产者或销售商推荐的，与该配方相类似的脱水培养基。 按以下程序配制培养基：将可溶性固体溶解在水中，必要时可加热促使其完全溶解，用HCl或NaOH溶液调节培养基的pH使其在使用时达到规定值。在25 ± 2℃时测定pH值。 如果配方中有琼脂，则琼脂的含水量不应超过15%，配方中的水均应为纯水。 PH 7.2磷酸盐缓冲液 储备液—在1000ml容量瓶中将磷酸二氢钾KH2PO434g（monobasic potassium phosphate）溶于约500ml水中，用NaOH TS（约175ml）调节pH至7.2±0.1。加水至刻度， 混匀。分装，灭菌。冷藏保存备用。 培养基 除非另有规定，培养基均应采用高压蒸汽灭菌方式（见灭菌项1211下，蒸汽灭菌）， 灭菌时间取决于待灭菌的培养基的体积。 I. 酪蛋白胨-大豆卵磷脂-聚山梨醇酯20液体培养基 Pancreatic Digest of Casein 酪蛋白胰酶消化物（胰酪胨） 20 g Soy Lecithin 大豆卵磷脂 5 g Polysorbate 20 聚山梨醇酯20 40 mL Water 水 960 mL 将酪蛋白胨、大豆卵磷脂溶解在960ml水中，在温度为48-50°C水浴中加热约30分钟使其完全溶解。 加40ml聚山梨醇酯20混合，按所需量分装。 II. 大豆-酪蛋白水解物琼脂培养基 Pancreatic Digest of Casein 酪蛋白胰酶水解物（胰酪胨） 15.0 g Papaic Digest of Soybean Meal 大豆木瓜酶水解物 5.0 g Sodium Chloride NaCl 5.0 g Agar 琼脂 15.0 g Water 水 1000 mL 灭菌后pH7.3 ± 0.2。 III. 大豆-酪蛋白水解物培养基 按无菌检查项71下大豆-酪蛋白水解物培养基的配制方法进行。 IV.甘露醇-盐琼脂培养基 Pancreatic Digest of Casein 酪蛋白胰酶消化物（胰酪胨） 5.0 g Peptic Digest of Animal Tissue动物组织胃酶水解物 5.0 g Beef