微生物学实验室常用试剂和培养基.doc

微生物学实验室常用试剂与培养基 第一节 常用试剂及其使用方法 一、诊断用纸片 ⑴ 杆菌肽纸片（0.04U/片）：抑菌圈10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。 ⑵ SMZ纸片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出现抑菌圈即为敏感。质控菌株：D群链球菌阳性， A群链球菌阴性。 ⑶ 新生霉素纸片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株：表皮葡萄球菌阳性， 腐生葡萄球菌阴性。 ⑷ O129纸片、奥普托欣（Optochin）纸片：参见第五节《生化试验培养基》。 二、诊断用血清 1.沙门菌属诊断血清 ⑴ A-F群O多价诊断血清。 ⑵ 特异O群因子诊断血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10诊断血清。 ⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子诊断血清。 2.志贺菌属诊断血清 志贺菌属4种多价血清：痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志贺菌多价血清及分型血清（1～6型），宋内志贺菌诊断血清，鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。 3.致病性大肠埃希菌诊断血清 肠致病性大肠埃希菌（EPEC）诊断血清，产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）诊断血清，肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）诊断血清，肠出血性大肠埃希菌（EHEC）诊断血清O157： H 7。 4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清 5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清 6.链球菌分类诊断血清 7.肺炎链球菌诊断血清 8.耶尔森菌诊断血清 三、常用染色液 1.革兰染色液 ⑴ 结晶紫溶液 A液：结晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸铵 0.8g， 蒸馏水80 ml。 染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。 ⑵ 碘液:碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。 将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。 ⑶ 脱色液：95%乙醇 ⑷ 复染液：沙黄2.5g，95%乙醇100ml为贮存液，取贮存液10ml，加蒸馏水90ml为应用液。 2.抗酸染色液 ⑴ 碱性复红染色液： ①萋纳石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液：浓盐酸3ml，95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液)：美蓝乙醇饱和溶液30ml，100g/L氢氧化钾溶液0.1ml，蒸馏水100ml。 ⑵ 金胺O-罗丹明B染色液： ①罗丹明B液：罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液：金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。 3.鞭毛染色液(改良Ryu法) A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，饱和硫酸铝钾溶液 10ml； B液：结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。 4.异染颗粒染色液 甲液：甲苯胺蓝 0.15g，孔雀绿 2g/L， 95% 乙醇2.0ml，蒸馏水100ml。乙液：碘 2g，碘化钾3g，蒸馏水300ml。 先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。 5.荚膜染色液 ⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液 ⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液。 基础培养基 一、液体基础培养基 1.蛋白胨水 [用途] 用于细菌靛基质试验；一般细菌培养和传代。 [配法] 蛋白胨（或胰蛋白胨）10g，氯化钠 5g，蒸馏水1L。 将上述成分溶于水中，校正pH 至7.2,分装试管，每管2~3ml，置121℃灭菌15min备用。 [质量控制] 大肠埃希菌生长良好，靛基质阳性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴性。 2.营养肉汤 [用途] 一般细菌的增菌培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。 [配法] 蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1L。 将上述成分称量混合溶解于水中，校正pH至7.4，按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min，作无菌试验后冷藏备用。 [质量控制] 金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。 [保存] 置冰箱3周内用完。 3.牛肉浸液培养基 [用途] 细菌培养最基础的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。 [配法]