实验一胡萝卜愈伤组织的诱导培养解说.doc

本科学生综合性实验报告 学号 114120238 姓名 杨万坤 学院 生命科学学院 专业、班级 11应用生物教育A班 实验课程名称 植物组培实验 教师及职称 龙维彪 开课学期 2013 至 2014 学年 第二 学期 填报时间 2014 年 5 月 20 日 云南师范大学教务处编印 一．实验设计方案 实验序号 实验一 实验名称 胡萝卜愈伤组织的诱导培养 实验时间 实验室 实验目的 1-1、通过本次实验，使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 1-2、通过本次实验，使学生进一步熟悉配制培养基的流程及操作中应注意的事项，学会设计和筛选胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方。 1-3、通过本次实验，使同学能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术。 1-4、通过本次实验，使学生进一步熟悉配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基；掌握愈伤组织状态的调控手段，设计适合的使愈伤组织增殖快、结构疏松的增殖培养基，以便能培养出下次细胞培养的材料。 1-5、通过本次实验，使同学熟练掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。 实验原理、实验流程或装置示意图 1-1、实验原理 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高 1-2、实验原理 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 1-3、实验原理 将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块在无菌条件下接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。 1-4、实验原理 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基 1-5、实验原理 将由胡萝卜肉质直根诱导产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖 试验流程 （1）实验总体流程 MS母液培养基的配置 胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基的配置 胡萝卜愈伤组织诱导 胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制 胡萝卜愈伤组织的继代培养 （2）无菌操作流程： （3）胡萝卜愈伤组织诱导培养流程： (4)胡萝卜愈伤组织的继代培养流程： 实验设备及材料 3-1实验设备 1-1、配制MS母液培养基所需的仪器设备和药品 仪器：冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0），电磁炉、电热恒温干燥箱等 药品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇(维生素B6)、盐酸硫胺素 (维生素B1)、甘氨酸、蒸馏水。 1-2、配置胡萝卜愈伤组织诱导培养培养基所需的仪器设备和药品 仪器：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、封口膜、橡皮筋/棉线、电炉/电磁炉、高压蒸汽灭菌锅。 药品试剂：MS培养基母液（大量元素、微量元素、铁盐、有机物）、琼脂、蔗糖、生长调节物质（ 2,4-D、6-BA、KT） 、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH。 1-3胡萝卜愈伤组织诱导所需设备 仪器：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、枪状镊子、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯等。超净工作台、恒温培养箱 药品试剂：胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2。 1-4、胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制 仪器：冰箱、普通天平、三角瓶、移液管、量筒、烧杯、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、封口膜、橡皮筋/棉线、