1.2.1基因工程的基本操作程序详解.ppt

课前准备 1.请同学们拿出笔、练习本、练习册和课本。 2.端正坐姿，集中精力，准备上课。 3.背诵以下知识： 1) 基因工程的别名、原理、操作环境/水平/对象/目的 2）限制酶的功能、特点 3）DNA连接酶的功能、种类 4）DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 5）载体的种类、质粒的概念 6）作为载体必须具备的4个条件 学习目标 1.简述基因工程的基本操作程序。 2.掌握获取目的基因的方法和基因表达载体的组成。 学习指导 请同学们用5分钟时间认真阅读课本P8-11全部内容，思考下列问题并标注在课本上： 1.基因工程的基本操作程序主要包括哪些步骤？ 2.获取目的基因的方法有哪些？ 3.基因表达载体的组成元件有哪些？分别有什么作用？ （图文结合） 5分钟后检测，看哪个同学完成的又快速又准确！ 基因工程的基本操作程序 获得目的基因的方法 从基因文库中获取 利用PCR技术扩增 人工合成（DNA合成仪） 1.从基因文库中获取目的基因 2.利用PCR技术扩增目的基因 * 专题1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序 1.目的基因的获取 2.基因表达载体的构建 3.将目的基因导入受体细胞 4.目的基因的检测与鉴定 　　常见实例：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因工程的基本操作步骤 一、目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 定义：主要指编码蛋 白质的基因。 什么是基因文库？ 什么是基因组文库和部分基因文库？ 怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 1）概念：PCR是聚合酶链式反应的缩写。是在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以短时间获得大量的目的基因。 3）过程（结合课本10页图1-8）： 90-95℃，变性（DNA双链解开） 55-60℃，复性（退火）（引物与DNA单链结合） 70-75℃，延伸（Taq酶合成子链） 多次重复循环 2）原料：模板、四种脱氧核苷酸、Taq酶、引物 循环 变性 退火 延伸 基因工程的基本操作步骤 二、基因表达载体的构建——基因工程的核心 目的： 基因表达载体的组成及各部分作用： 、 、 、 等 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 目的基因 启动子 终止子 标记基因 RNA聚合酶识别和结合的部位 使转录停止 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 1.基因工程的基本操作程序。 2.获取目的基因的方法。 3.基因组文库和部分基因文库的概念。 4.PCR技术的概念和过程。 5.基因表达载体的组成元件及各部分作用。 课堂小结