000001bc_邢国振-药物安全评价.doc

马兜铃酸I和马兜铃酸II肾脏致突变作用比较研究 邢国振 栾洋 任进 (中国科学院上海药物研究所 药物安全性评价研究中心) 摘要 目的：含马兜铃酸（AA）中药在一定范围内仍被大量使用。AAI和AAII是AA的两个主要成分。目前马兜铃酸肾病（AAN）的研究主要集中于AAI，AAII在其中的作用并不明确，容易被忽视。而AA是较强的致突变原和致癌原，AAI和AAII体内致突变作用强弱关系也不明确，AAII可能在致突变和致癌方面起着更主要的作用。因此本研究应用gpt delta 转基因小鼠比较AAI和AAII肾脏致突变作用，为含AA中药材的临床应用提供参考。方法：AAI和AAII致突变作用比较，实验采用♂gpt delta 转基因小鼠，AAI和AAII分别给予1 mg·kg-1和5 mg·kg-1 两个剂量（ig），对照组小鼠给予1%NaHCO3，每周 5 次，连续给药 6 w，第 7 w为表达期，第 8 w 处死，取肾脏检测突变率；AAI/II-DNA加合物形成，实验采用♂gpt delta 转基因小鼠，设5 mg·kg-1 剂量（ig），连续给予2 d，最后 1 次给药 24 h 后处死，取肾脏用LC-MS/MS检测AAI/II-DNA加合物；AAI和AAII组织分布，实验采用1 mg/kg和5 mg/kg两个剂量（ig），利用HPLC检测30 min和60 min小鼠血浆和肾脏中AAI/II原型和还原产物含量。 结果：肾脏AAII-DNA加合物生成量要高于AAI(p0.05)；gpt delta 转基因小鼠肾脏突变率随着AAI和AAII剂量增加而增高（p0.05）。相同剂量下，AAII引起的肾脏突变率高于AAI；在5 mg?kg-1 时，AAII引起的肾脏突变率明显高于AAI（p0.05）；AAI和AAII 组织分布，1 mg?kg-1：AAII血浆浓度，肾脏浓度在30 min 时是AAI 的7.2倍和35.0倍，60 min时已检测不到AAI；未检测到还原产物马兜铃内酰胺I（ALI）和马兜铃内酰胺II（ALII）。5 mg?kg-1：AAII 血浆浓度，肾脏浓度在30 min和60min 时是AAI 的4.4，31.5倍和7.7，8.8倍。ALII的肾脏浓度在30 min和 60 min 时略高于ALI，但统计学无差异。结论：相同剂量下，AAII诱发小鼠肾脏突变率高于AAI，不同的代谢途径造成的组织内浓度不同是AAII引起肾脏突变率高于AAI的主要原因；含AA中药临床应用时要考虑AAII的含量。 关键词 马兜铃酸 DNA加合物 致突变 转基因小鼠 Comparative Study of Aristolochic Acid I and Aristolochic Acid II in Mutagenesis in Kidney by Using Gpt Delta Transgenic mice Guozhen Xing ,Yang Luan , Jin Ren Abstract OBJECTIVE: Chinese traditional medicine contained aristolochic acid（AA）has been largely used in certain areas. AAI and AAII were the main components of AA and AAI was thought to be the main component that caused AAN, the effects of AAII was not sure. AA was a potent mutagen and carcinogen. So far, it is uncertain that which component could induce higher mutation frequency in vivo. Hence we compare the mutagenesis of AAI and AAII in kidney by using gpt delta transgenic mice and provide information for clinical application of Chinese traditional medicine contained AA. METHODS: In the comparetive study of AAI and AAII in mutagenesis, groups of four gpt delta trangenic mice(five heads for vehicle control group) were gavaged with 0