04_切片技术流程(主要内容根据中华医学会资料整理_打印给学生).doc

一、 组织切片的制备 1. 取材：厚度0.3cm（不应大于0.5cm），面积（1－1.5）cm×（1－1.5）cm。 2. 固定：4%中性甲醛（10％中性福尔马林）固定4－6h。标本大时18－24h或更长。 3. 水洗 用流水冲洗已经固定的组织块30min。 4. 脱水（常温下） （1）乙醇－甲醛（AF）液固定：60－120min（2）80％乙醇：60－120min （3）95％乙醇I：60－120min（4）95％乙醇II：60－120min （5）无水乙醇I：30－60min（6）无水乙醇II：30－60min （7）无水乙醇III：30－60min 5. 透明（1）二甲苯I：20min（2）二甲苯II：20min（3）二甲苯III：20min 6. 浸蜡（1）石蜡I（45－50℃）：60min（2）石蜡II（56－58℃）：60min（3）石蜡III（56－58℃）：60min 7. 包埋： 8. 切片：4μm 9. 展片：45℃ 10. 贴片： 11. 烤片： 60~62℃，30~60min） 二、苏木精－伊红（HE）染色 （一）染色程序 （1）二甲苯I： 5－10min （2）二甲苯II ： 5－10min （3）无水酒精I： 1－3min （4）无水酒精II：1－3min（5）95% 酒精 I：1－3min（6）95% 酒精 II：1－3min （7）80% 酒精：1min（8）蒸馏水：1min（9）苏木素液染色：5－10min （10）流水洗去苏木精液：1min（11）1%盐酸－乙醇分化：1－3s （12）稍水洗：1－2s（13）返蓝（用温水或1％氨水等）：5－10s 上述（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间须延长至10－15min（细胞核显示更清晰）。 （14）流水冲洗：1－2min（15）蒸馏水洗：1－2min（16）0.5％伊红液染色：1－3min （17）蒸馏水稍洗：1－2s（18）80％酒精：1－2s（19）95%酒精 I：2－3min （20）95%酒精 II：2－3min（21）无水酒精 I：3－5min（22）无水酒精II：3－5min （23）石炭酸－二甲苯：3－5min该项可用无水乙醇代替，北方地区可省略。 （24）二甲苯I：3－5min（25）二甲苯II：3－5min（26）二甲苯III：3－5min （27）中性树胶封固：干涸前封好。 （二）染色结果 常规石蜡包埋－HE染色切片质量的基本标准 优质标准 质量缺陷减分 组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数 组织稍不完整：减1－3分；不完整：减4－10；未达到规定面数：减5分 切片薄（3－5μm），厚薄均匀 切片厚（细胞重叠），影响诊断：减6－10分；厚薄不均匀：减3－5分 切片无刀痕、裂隙、颤痕 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶或折叠，影响诊断：各减5分 切片无污染物 有污染物：减10分 无气泡（切片与载玻片间/盖玻片与切片、载玻片间），盖玻片周围无胶液外溢 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分 透明度好 透明度差：减1－3分；组织结构模糊：减5－7分 细胞核与细胞质染色对比清晰 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分；红（细胞质）与蓝（细胞核）对比不清晰：减5分 切片无松散，裱贴位置适当 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当：减5分 切片整洁，标签端正粘牢，编号清晰 切片不整洁：减3分；标签粘贴不牢：减3分；编号不清晰：减4分 三、石蜡切片的异常及处理 一张理想佳良的切片，除组织固定适当和染色清晰之外，还应具备：薄、平整，无皱褶压缩，无裂损抓迹及擦痕，同时贴片排列密集，整齐位置适当，透明度好，封片用胶适量，盖玻片端正，无气泡等。 （一） 影响切片质量的因素（表一） 制片程序 影响因素 取材 组织形态不规则，过大，厚薄不均 组 织 的 处 理 固定 脱水 透明 浸蜡 包埋 不及时：固定液选择不当 脱水不良；或时间过长 透明过长；或透明不足 时间不当；石蜡质量不纯，熔度选择不当 石蜡的硬度组织位置安排不当，包埋不平、碎组织散乱 切片 切片刀不够锋利，刀身角度固定不当 切片机性能掌握不够，保养不当 技术熟练程度不够 （二） 石蜡切片中的异常及原因和处理方法（表二） 异常表现 原因和处理方法 切片纵裂或纵断 1、刀刃损，须磨、鐾。 2、刀口粘附细丝维，须擦净刀口。 3、组织内有细小过硬异物或骨质等。剔除异物，骨质脱钙。 切片弯曲或滚卷 1、刀钝须磨或鐾。 2、刀的倾角过大，调整。 切片厚薄不均，宽窄相间，或在每张切片上有厚薄区带 1、切片机调整螺旋须紧固。 2、