10生物班王世忠文献综述.doc

四川裂腹鱼同工酶研究文献综述： 姓名：王世忠 10生物（2）班 学号：08111002025 四川裂腹鱼在分类上属于鲤形目、裂腹鱼亚科，喜欢在流水湍急的峡谷江段生活。主食水生昆虫幼虫等，最大个体近500mm,有重要的经济价值。主要分布于长江上游的金沙江、雅砻江水系。由于近年来遭到滥捕和环境污染的严重破坏，该鱼天然资源量已经十分稀少。本实验对四川裂腹鱼中不同组织的同工酶进行研究，在丰富其基础生物学内容的同时，为其他鱼类同工酶的研究提供参考。 ??同工酶是生物体内基因转录和翻译的直接产物，它反映了编码酶蛋白的DNA序列信息[1]，酶谱的变化反映了等位基因和位点[2]的变化，同工酶的产生是进化过程中代谢的适应，是基因表达的产物，愈是关键的代谢调控酶或与外界环境密切的酶，同工酶越普通，分子类型也愈多。利用凝胶电泳技术[3]，能够得到具有较好的的同源性和可比较的同工酶谱，通过对酶谱的进一步分析，可以较深入、直接地了解物种的遗传信息[4]，包括群体的遗传结构、个体发育过程同工酶的表达和组织特异性等内容。同工酶电泳技术的使用大大促进了人们对种的遗传过程的认识，并且随着生化技术的提高，这种研究方法不断得到完善，研究领域继续拓展。 对于鲤科鱼类同工酶的研究: 有胡思玉白建梅葛传龙,王延斌陈永祥昆明裂腹鱼淀粉酶活性研究杨正玲 赵世海 龚疏影 董仕州河鲤、建鲤和框鳞镜鲤的mtDNA D-loop的RFLP分析唐文家 祁得林杨成 申志新黄河裸裂尻鱼乳酸脱氢酶同工酶研究刘鸿艳 谢从新鱼类同工酶应用及研究进展王金秋 石椿松江鲈鱼(Trachidermus fasciatus)不同组织同工酶的研究赵凯青海湖裸鲤与鲤、鲫、草鱼的随机扩增多态DNA分析全成干 王军 丁少雄 苏永全大黄鱼养殖群体遗传多样性的同工酶朱必凤 葛刚 彭志勤 薛喜文 罗莉菲鄱阳湖鳜鱼、团头鲂肌肉四种同工酶研究高背银鲫、大口胭脂鱼及胭脂鲫(F_1)不同组织的同工酶的表型分析0.1mol/LNa2HPO4610 ml+0.1mol/L NaH2PO4390 ml 1000ml 0.1mol/L Tris-HCI(PH8.8)缓冲液：121g Tris溶于ddH2O,用HCI调PH8.8,定溶1000ml 1000ml 0.1mol/L Tris-HCI(PH6.8)缓冲液：121g Tris溶于ddH2O,用HCI调PH6.8,定溶1000ml 1000ml Tris-Gly溶液(PH8.3)(5*)：Tris3.03g,Gly14.42g,定溶1000ml 30%聚丙烯酰胺溶液：丙烯酰胺30g,甲叉双丙烯酰胺0.8g,加ddH2O 100ml,过滤,保存。 3.3.3 制胶 分离胶(18ml)： 30%聚丙烯酰胺溶液 4.5 ml 0.1mol/L Tris-HCI(PH8.8) 6.72 ml ddH2O 6.72 ml 10%过硫酸铵 0.12 ml TEMED 18 ul 将上面几种溶液混合,立即加到玻璃板里,然后在胶上面加一小层蒸馏水,1小时后,用滤纸把水吸干,再加浓缩胶。 浓缩胶(10ml)： 30%聚丙烯酰胺溶液 1.67 ml 0.1mol/L Tris-HCI(PH6.8) 1.25 ml ddH2O 7.03ml 10%过硫酸铵 0.1ml TEMED 12ul 将上面几种溶液混合,立即加到玻璃板里,然后在胶上面轻轻插上梳子。 3.3.4 加样 加完浓缩胶1小时之后,轻轻取出梳子,用滤纸把每个孔里的水都吸干,分别加人9种不同的组织各50ul。 3.3.5 电泳 加样完毕后,在40C条件下进行电泳,具体是这样,在电泳槽里加入Tris-Gly溶液(PH8.3)(5*)电极缓冲液,电泳时间：100V浓缩1小时,200V分离3-4小时.电泳完毕后,取出胶板,在注射器里装满水,顺着胶板壁将胶冲到培养皿中去,然后用蒸馏水算洗1到2次。 3.3.6 染色 将配制好的染色液(具体配方见下)培养皿中,染色30分钟到1小时。 3.3.7 保存 到掉染液,用蒸馏水算洗1到2次,保存于7%的醋酸中。用于拍照及结果分析 4.各种染色液的配方 4.1 乳酸脱氢酶：NAD+50mg、PMS2mg、NBT30mg，1M乳酸钠(PH7.0)10ml,0.1M氯化钠5mg,0.5MTris-HCI(PH7.1)15ml,100ml容量瓶定容。 4.2