2010生物显微技术论文半薄切片法.doc

生物显微技术课程论文 （2010——2011学年，第一学期） 半薄切片法 摘要：半薄切片(厚度为 0.5μm ～ 1μm )的制备是一种常用制样手段。半薄切片图像的清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野大于超薄切片，有利于获得高质量的光镜图像，同时也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。其中的一些关键技术如切片，染色等也不同于石蜡切片和超薄切片，有其特点和难点。 、半薄切片样品制备步骤：取材 固定 漂洗 脱水 渗透 包埋 半薄切片 切片染色 包括以上几个步骤。其中的一些关键技术如切片，捞片，脱脂，染色等也不同于石蜡切片和超薄切片，有其特点和难点。 渗透迅速，固定根尖和花药只需30-60分钟，但固定时间不能太久，一般不超过一天 切片染色——半薄切片的染色法碱性复红法、苏木素-伊红法等。 ①几种染色方法及现象 ②染料介绍： 染色原则：先用碱性染料染再用酸性染料染。 ③各种染色剂的特点 常规的甲苯胺兰染色液是以磷酸缓冲液(pH7．2)为溶剂呈弱碱性，而硼砂(Na：B 0 ·10H20)水溶液呈强碱性pH9．3。通过以其代替磷酸缓冲液配制的甲苯胺兰染色液，大大提高了组织细胞的着色力。比较改良前后的两种甲苯胺兰染色液，改良后的染色液不仅不需脱树脂等繁琐步骤而省时，组织细胞的结构更清晰。 美蓝-天青Ⅱ法、碱性复红法、苏木素-伊红法染出的颜色单一,或者程序较多、所需时间长。Chien法虽无上述缺点,但染片容易出现过染,常呈现一片红色,分色也不易控制。 半薄切片进行光学显微镜观察的对于超薄切片来说，包埋块中的组织面积还嫌大，还需要修小，如果盲目地修小，就有可能把要观察的部分修掉，因此要切厚片用光学显微观察，以便准确定位，保留要用电镜观察的部分，修去其余部分 ④便于对同一组织的同一部位进行光学显微镜和电镜的对比观察。半薄切片定位以后，要对包埋块作进一步的修整。通常将块的顶端修成金字塔形，顶面修成梯形或长方形 ( 最好是梯形 ) ，每边的长度不超过 0.2mm ～ 0.3mm 为宜。 半薄切片，被应用于各个方面，如，胚胎学，病理学，等等一种半薄切片（）的制备，在如今是一种常用制样手段。半薄切片图像的清晰度、分辨率远优于石蜡切片，视野也大于超薄切片，所以有利于获得高质量的光镜图像。 同时，半薄切片，也是电镜超薄切片技术中一种有效的定位方法。）切片捞起后，放于涂有聚赖氨酸的玻片上HCl脱树脂，在材料上滴一滴亚甲基蓝，着色后冲洗、封藏、烘干 [2]、韩琳，吴鹏，徐军沈阳医学院学报 第10卷第3期2008年9月 [3]、蔡文琴主编，2003 现代实用细胞与分子生物学实验技术 北京：人民军医出版社 [4]、李建武等合编，1994 生物化学实验原理和方法 北京：北京大学出版社 [5]、李素文主编，2001 细胞生物学实验指导 北京：高等教育出版社/施普林格出版社 [6]、宋英淑 于智深 朱光新 郑成国黑龙江农业科学报 1997年第三卷第五期