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中和试验检测低水平HbsAg的意义

  中和试验检测低水平HbsAg的意义   我国广泛用酶免疫法(ELISA)检测HBV血清标志物,但ELISA法存在“灰区”,低水平的检测值无法避免假阳性、假阴性。近年来微粒子酶免法(MEIA)和化学发光法(CLIA)等灵敏度高的自动化检测方法逐步应用,检测下限越来越低,低水平HBsAg检测率逐步增加,但是自动化检测成本昂贵,不易作为常规应用。中和试验因灵敏度和特异性都很高,在病毒学检测中往往作为确认试验。本文用中和试验对低水平HBsAg进行检测,初步探讨其临床意义。   1.对象与方法   1.1 研究对象   本院经ELISA试剂盒检测HBsAg为弱阳性(1≤S/CO≤5)血清样本35例,经CLIA检测HBsAg为弱阳性(0.05IU/mL≤报告值≤2.00 IU/mL)的血清样本10例.   1.2 检测方法   (1)ELISA检测HBsAg采用上海科华公司试剂盒,CLIA检测HBsAg采用雅培ARCHITECT i2000SR免疫发光分析仪及配套试剂。   (2)ELISA中和试验方法:采用珠海丽珠公司HBsAg中和试剂盒检测。试验原理[1]:在用抗-HBs抗体包被的微孔中分别加入含抗-HBs抗体的试剂和待测血清,试剂中的特异性抗-HBs抗体与固相抗-HBs竞争结合血清中的HBsAg,从而使结合到固相上并与酶标抗-HBs结合形成夹心复合物的HBsAg量减少,最后显色反应较浅,计算抑制率并与对照孔比较,可以判断血清中是否存在HBsAg。   2.结果   2.1 ELISA法中和试验结果   如表1所示,ELISA检测为弱阳性的35例样本,经中和试验确认有8例阴性,27例阳性。   2.2 经CLIA检测为弱阳性的10例样本,中和试验确认有4例阳性,见表2。 2.3 中和试验抑制率与肝功能、HBV-DNA的关系45例低水平HBsAg样本经的肝功能及HBV-DNA结果,见表3,抑制率值越大,肝功能异常率越高,HBV-DNA阳性率也越高。   3.讨论   本次试验的45例低水平HBsAg血清样本中,ELISA法确认试验确认为HBsAg阳性31例、阴性14例,而化学发光法检测45例样本均为阳性。可见ELISA与化学发光法检测低水平HBsAg结果存在不一致性。ELISA检测HBsAg影响因素较多,温育温度、时间及方式对ELISA测定结果均有影响,因此,低水平的HBsAg筛查值的确认极其重要。《全国临床检验操作规程》建议必要时应采用中和试验进行确认,特别是弱阳性的检测结果需进一步确认。   虽然低浓度的HBsAg的患者占乙肝病毒感染者的比例很低,但在临床实践中,低浓度的HBsAg样本(低于国产试剂的检测下限)也经常能被发现, 血清HBsAg呈低浓度存在可能有多种原因,但主要原因是大多数HBV感染患者随着年龄增长,HBV逐渐清除,HBsAg逐渐下降,并可能伴有血清学转换,出现抗-HBs等。“弱反应性”检测结果的确认应使用特异性高的方法,比如中和试验,作为确认试验可减少错误检查结果的误导。   有研究表明,HBsAg阳性特别是低水平阳性并不能确诊为HBV感染。由于HBsAg是HBV的外衣壳,可单独存在于血液中,特别是近期注射过乙肝疫苗的患,单凭HBsAg阳性并不能说明受检者体内存在HBV。如果单纯提高HBsAg检测灵敏度,那么HBsAg阳性检出率也会增高,也就造成假阳性结果增多,对临床诊断并无意义,反而给受检者增加精神负担和压力。低水平HBsAg的临床价值有待进一步探讨。

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