二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素.docVIP

二乙酰一肟氨基硫脲法检测游泳池水中尿素 饶国强 武义县疾病预防控制中心 321200 尿素含量是游泳池水质检验中一项重要的卫生指标，国标方法GB/T18204.29-2000中用的二乙酰一肟安替比林法存在显色后遇光褪色，线性范围窄的缺点。本人借鉴临床生化检验中的尿素氮测定方法，设计了二乙酰一肟氨基硫脲比色法，结果令人满意。 1．原理 尿素在氨基硫脲存在下，与二乙酰一肟在强酸环境中加热，生成红色的二嗪衍生物。显色强度在一定范围内与尿素含量成正比。 2．材料与方法 2．1 仪器 721-分光光度计 2．2 试剂 2．2．1 酸性试剂 浓硫酸200ml与磷酸300ml混匀，冷至室温。加氨基硫脲50mg，硫 酸镉2.0g溶解，棕色瓶冷藏至少可保存一年。 2．2．2 二乙酰一肟溶液 称取4.0g二乙酰一肟，溶解后加纯水至200ml，棕色瓶冷藏可 保存半年。 2．2．3 尿素标准贮存液 准确称取0.1000g尿素，加少量纯水溶解后，移至1000ml容量 瓶中，加5滴三氯甲烷作防腐剂，用纯水定容至刻度。4℃保存，此溶液尿素浓度为0.1mg/ml。 2．2．4 尿素标准使用液 临用时将尿素标准贮存液稀释10倍。此溶液尿素浓度10ug/ml。 2．3 操作步骤 2．3．1取水样10ml于具塞标准比色管中。另取比色管8只，分别加入10ug/ml的尿素标 准使用液0、0.10、0.25、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00ml，各加水至约10ml。 2．3．2 每管各加酸性试剂5.0ml，2%的二乙酰一肟溶液2.0ml，加纯水至25ml。沸水浴 12分钟，取出后用冷水冷却至室温。 2．3．3 以空白管调零，在540nm处，用1cm比色皿测定各管吸光值。以浓度对照吸光 值，制备标准曲线。以水样的吸光值在标准曲线上查出尿素含量。 2．3．4 计算 C＝ M ×1000 V 试中：C―水样中尿素浓度，mg/L； M－从回归方程算得水样中尿素质量，ug ； V－水样体积，ml。 3．结果与讨论 3．1 加热时间 国标法中的加热时间为50分钟，而本法加热12分钟即可完全显色。 3．2 显色稳定性 酸性试剂中的氨基硫脲与硫酸镉可促进尿素与双乙酰结合，提高灵敏度和显色后的 稳定性。国标法显色后的溶液遇光易褪色，本法溶液显色后至少可以稳定2h吸光值 无变化。 3．3 最低检出限与线性范围 本法的最低检测量为1.0ug，若取10ml水样，最低检测限为0.1mg/L。在1－50ug 范围内，有良好的线性关系。 3．4 标准曲线及回归方程 标准曲线制备见表1，回归方程Y= -0.124+67.821X r＝0.9998 表1 标准曲线制备 Y标准含量（ug） x±s 变异系数（％） 1.0 0.015±0.0012 6.7 2.5 0.040±0.0026 6.5 5.0 0.075±0.0044 5.8 10.0 0.155±0.0051 3.2 20.0 0.290±0.0094 3.2 30.0 0.445±0.0086 1.9 50.0 0.740±0.0125 1.7 3．5 回收率试验 各取4份含不同浓度尿素的游泳池水样10ml,分别加入10ug/ml的尿素标准使用液 1.0ml测回收率，结果见表2。 表2 回收率试验结果 样品号 原含量（ug）））