医学微生物学实验-5.docVIP

医学微生物学实验五教案 课程名称：医学微生物学实验 实验内容： 1. 其他微生物的形态观察 (阅片) 自阅片：钩 体 示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、 沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体 2. 钩体显微凝集试验 (示教) 3. 变形杆菌动力观察 (自做) 授课对象：本科临床、口腔、麻醉、影像、急诊、五官、肿瘤；船本临床、麻醉等 实验方式：讲授＋自做 实验教材： 一、实验目的与要求： 1、熟悉钩端螺旋体、支原体菌落、梅毒螺旋体、沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体形态与染色性； 2、熟悉钩体的显微镜凝集实验原理及观察方法。 二、实验内容及时间分配（分钟）： 1．讲 授 30 min 2．其他微生物的形态观察（阅片） 40 min 自阅片：钩体 示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体 3．钩体显微镜凝集试验（示教） 20 min 4．变形杆菌动力观察 30 min 5．小结 10 min 三、重点：钩体显微镜凝集实验原理 四、思考题 1、支原体与细菌L型的鉴别要点有哪些？ 2、原体与始体的区别。 五、作业： 绘示教图 医学微生物学实验五讲稿 一 、支原体： 支原体(Mycoplasma)是一类没有细胞壁，呈高度多形态性，能通过0.45um滤菌器,胞膜富含固醇，含DNA与RNA，呈二分裂繁殖的原核细胞型微生物；支原体是目前所知能在无生命培养基中繁殖的最小。支原体对营养物质的要求高于一般细菌，除基础营养物质外还需加入10%～20%人或动物血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，在合适环境中孵育，约3～4繁殖一代，在琼脂含量较少的固体培养基上，2~7长出直径约10～600μm的典型的荷包蛋样菌落。低倍镜下观察菌落呈圆形，中心致密隆起，深入琼脂，外周由一层薄的透明颗粒包绕 支原体菌落，Diense染色，×100 支原体有许多特性与细菌L型相似，如无细胞壁、呈多形性、能通过滤菌器、对低渗敏感、“油煎蛋”样菌落，但细菌L型在无抗生素等诱导因素作用下易返祖为原菌，支原体则在遗传上与细菌无关。 (与螺旋体区分开来)，具有独特发育周期(与立克次体区分开来)，并能通过细菌滤器(与细菌区分开来)。 根据衣原体的抗原结构和DNA同源性的特点，衣原体科(Chlamydiae)分为两个属：衣原体属和嗜衣原体属。衣原体属又分为3个种，即沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis)，鼠衣原体和猪衣原体；嗜衣原体属又分为肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae)、鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci)等多个种。 衣原体种类虽多，仅少数能致病，引起人类疾病的衣原体主要为：沙眼衣原体 (C. trachomatis, Ct)，肺炎嗜衣原体(C. pneumoniae, Cpn)，鹦鹉热嗜衣原体 (C. psittaci, Cps)。 衣原体的独特的发育周期在包涵体内完成。 沙眼衣原体包涵体发育示意图 沙眼衣原体包涵体 (眼结膜刮片，Giemsa染色，×1000) (眼结膜上皮细胞轮廓不清楚，眼结膜上皮细胞核边呈帽状的为衣原体包涵体) 三、立克次体 立克次体(rickettsia)是一类大小介于病毒和细菌之间、以节肢动物为传播媒介、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。立克次体是引起斑疹伤寒、恙虫病等传染病的病原体。 对人类致病的立克次体主要包括3个属，即立克次体科的立克次体属（Rickettsia）和东方体属(Orientia)以及无形体科的埃立克体属(Ehrlichia)。 大多数立克次体为专性细胞内寄生，以二分裂方式繁殖，生长速度缓慢。培养立克次体常用的方法有动物接种、鸡胚接种和细胞培养。鸡胚卵黄囊常用于立克次体的传代。 恙虫病东方体(O.tsutsugamushi)是恙虫病的病原体。该病主要流行于东南亚、西南太平洋岛屿、日本和我国的东南与西南地区。姬姆萨染色：在胞质内近核旁成堆排列。 恙虫病立克次体 (感染小鼠腹腔液，Giemsa染色，×1000) 四、螺旋体 是一群细长、柔软、弯曲的呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物，介于细菌和原虫之间。与细菌相似，有细胞壁，二分裂繁殖。对人致病的有三个属：疏螺旋体属、密螺旋体属、钩端螺旋体属。 （1）梅毒螺旋体：为密螺旋体，菌体呈棕褐色，有8~14个致密而规则的螺旋，形似细密的弹簧。 梅毒螺旋