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呼吸系统病毒的分子检测 作者：佚名????文章来源：互联网????点击数： 105????更新时间：2009-8-10 ?????????? 原创 ——美国食品及药物管理局清理嵌板以扩大实验室的选择 Deborah Levenson?编译：袭莎摘自于《Clinical Laboratory News》 2008 年3月：34卷，第3期 ??? 虽然呼吸系统病毒不会经常引起严重疾病，但其在操劳过度的成年人中会引发大量需住院治疗的疾病及死亡—包括携带艾滋病病毒和慢性阻塞性肺病的患者或老年人或进行化疗的患者及缺乏完全成熟免疫系统的儿童。在这些患者中，流行性感冒、呼吸合胞体病毒（RSV）及其它病毒可迅速威胁生命。美国疾病控制与预防中心估计每年在美国流行性感冒引起20万患者住院治疗、3.6万人死亡，在全球范围内RSV成为婴儿与儿童呼吸道疾病高发的最普遍原因。呼吸道疾病症状严重的患者，快速、准确的诊断可使患者获得正确的治疗，缩短在医院治疗时间。 ??? 然而，传统的诊断方式还存在许多待改进之处。特殊病毒通过酶免疫测定（EIA）的快速检测很容易、便宜，但是并不很灵敏，但是较复杂的直接荧光抗体（DFA）检测具有较好的灵敏性，并适用于大部分病毒类型检测，然而，DFA需要正确的培训与专门设备。培养得出的结果，一旦认为其就是金标，至少需要1-2天甚至更长的时间。单独呼吸系统病毒的分子检测在3小时内显现最好的灵敏性，但是它们需要昂贵的设备及正确培训的工作人员。至今，想为呼吸系统病毒提供分子检测的实验室研究自己的检测、进行严格的确认。 ??? 复合分子呼吸检测可使实验室只使用一个实验一个样本检测多个病毒，但是并没有现在实验室研究的分子方法的确认与进行中的质控，因此美国食品及药品管理局（FDA）将其清除。在2008年一月，FDA清除xTAG呼吸滤过性毒菌嵌板（由Luminex分子诊断推广，多伦多，加拿大），ProFlu+实验（由Prodesse, Inc.推广，密尔沃基，威斯康星州）。ProFlu+可检测三种最常见的呼吸病毒，xTAG RVP可检测五种，包括三种流行性感冒A类型。 ??? 这些复合检测与实验室研究的形式可确认双重感染，可能是未来的发展动向。“这些检测在未来五年中具有成为健康检查标准的潜力，” Sheldon Campbell宣布（医学博士，康涅狄格州新天堂耶鲁大学医学院医学实验室教授）。但是他和其它实验室主任强调在呼吸系统病毒中使用复合分子检测的决定依赖个别实验室和医院的特殊需求。如果这些检测所需的费用与工作确实能够推动严重呼吸系统疾病的诊断，在这些因素中要考虑患者种族、工作人员、工作流程。 不同的检测 ??? 清除的检测在它们的范围、技术和转换时间上存在明显不同之处。ProFlu+是实时PCR，联通管测试可同时检测流行性感冒A、B及RSV，这些病毒造成大半的严重呼吸道疾病。使用鼻咽样本，检测使用实时技术在一个管中进行反转录与PCR。全部过程，包括萃取估计要花费三个小时。根据Andy Shrago （Prodesse市场营销副总裁），Prodesse上市的试剂为5,250美元，包括一百个反应所需的试剂。清除ProFlu+是由于其使用两个自动核酸萃取系统，在一系列实时呼吸PCR检测中第一个希望FDA清除的公司。Steve Virsuri（博士，Prodesse科学部主任）指出这些包括人体变型肺病毒和副流感病毒。 ??? 相反，xTAG RVP实验可检测更多的病毒，但更复杂、需要时间。流行性感冒A H1、H3、非特定类型的嵌板检测与区别，检测RSV A，RSV B，流行性感冒B，副流感病毒1、2、3，变型肺病毒，鼻病毒及腺病毒。欧洲市场的检测类型为H5N1，就是我们熟知的禽流感，但是FDA并没有将其清除，因为“患者样本数量不够并没有达到FDA提出的标准，” Jeremy Bridge-Cook（博士，Luminex副总裁）提出。检测过程包括PCR扩增，然后在Luminex设备上进行分析。通过公司估计，全部过程序要6.5个小时，包括1.5个小时的准备时间。试剂盒与分析软件在一起，但是实验室必须必须购买特殊批号的辅助试剂，根据嵌入的产品其已经由Luminex质量控制系统修正。因为Luminex设备是一种开放式管路系统，实验室为防止污染必须在独立区域进行前-后PCR扩增，然后加入嵌入物质。 ??? 一些实验室曾使用xTAG RVP检测质疑公司估计的时间。Helen Fernandes（博士，纽瓦克新泽西州牙科与内科大学病理学院分子诊断教授与主任）说，“从开始到结束需要7-8个小时，检测中的大部分时间需要一心一意的关注。” xTAG RVP的灵敏性与特异性 病毒 灵敏性 特异性 流行性感冒