实验2植物减数分裂染色体制备.docVIP

实验2? 植物减数分裂染色体制 一、实验目的 掌握花粉母细胞染色体制片技术； 了解减数分裂过程中染色体的变化特征。 增强对植物细胞减数分裂的感性认识，进一步加深对减数分裂的理解。 二、实验原理 减数分裂的概念理解。 减数分裂过程中的染色体变化的特点。 减数分裂的遗传学意义。 由于植物花药取材容易，操作方便，一般作为减数分裂制片材料，在发育的适宜时期取样、固定、压片等程序，便可在显微镜下观察到减数分裂时染色体的行为变化。 三、实验材料、器具及试剂 黑麦幼穗 镊子、载玻片、盖片、解剖针、吸水纸 醋酸洋红、改良卡诺固定液（95%乙醇∶冰醋酸=3∶1） 1．取材：选取适宜的小花或小穗，是实验的关键。不同材料鉴别方法不同。一般在9－11时固定，不需预处理。 ：在旗叶挑出后，旗叶与叶的叶耳间距为3-4cm左右时，花药黄绿色，即处于减数分裂时期。8-10点为取材最佳时间。 2．固定：将所取的幼花序立即放入固定液中固定2－24小时。经95％、80％酒精冲洗后，保存于70％酒精中保存备用。 (1) 迅速防止细胞死亡后的变化,防止自溶、腐败，尽量保持生长状态结构。 (2) 使细胞中的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持生前的形态。 (3) 使组织内各种物质成分产生不同的折光率，便于观察和鉴定。 (4) 使不同组织成分对染料有不同的亲和力，便于染色。 (5) 防止细胞过度收缩或膨胀，失去原有的形态结构。 3．制片：取一小穗置载片上，用解剖针3-4段(或加以纵切)，加1滴醋酸洋红（或改良苯酚品红）染液。用解剖针轻压花药，使花粉母细胞从切口出来。静置染色5-10分钟。去除残存的花药壁，加盖玻片，使染色液刚好布满，在盖玻片与载玻片之间成一薄层(不能过多，以防止花粉母细胞溢出盖玻片的边缘)。观察分裂相 4．烤片：用镊子夹住载片，在酒精灯上来回移动，并不时将片子放在手背上试温，以不烫手为宜。经烤片后，细胞质颜色减退，使染色体得到充分鲜明的着色。 5．置换：若染色太深，可从盖片一侧滴加45％冰醋酸，在另一边用滤纸吸，让冰醋酸从盖片下流过，置换出染液，使细胞质背景颜色变浅。 6．压片：在盖片上覆以滤纸，用拇指均匀用力压下，勿使盖片移动。镜检 四、作业 记录观察到的时期，绘成简图。 固定的目的什么？（思考题） 附：1％醋酸洋红配制： 1克洋红，加入100ml45%醋酸，煮沸1小时，保存备用，用时过滤。加Fe(Ac)3媒染剂或放一生锈的铁钉，染色效果好。