实验报告(小鼠γ照射后尿中牛磺酸排出量的测定).docVIP

实验名称 小鼠γ照射后尿中牛磺酸排出量的测定 实验日期 2013.5.31 小组成员 实验目的 了解电离辐射对蛋白质代谢的影响 实验原理 辐射使机体蛋白质分解代谢加速，代谢过程中含硫氨基酸氧化形成牛磺酸等从尿中排出增加。 尿样用氢型阳离子交换树脂处理后，除出大部分氨基酸，但牛磺酸不被吸附，滤液与二硝基氟苯（FDNB）作用后生成黄色衍生物，比色测定。 实验器材 实验动物：小鼠 实验试剂：硼酸缓冲液，FDNB，HCl，水，三氯甲烷，标准液 实验器材：移液管（1ml，2ml，5ml，橡胶吸头，），水浴箱，分光光度计 方法与步骤 分别收集正常小鼠和受照射小鼠24h尿液（1ml） 尿液离心后取上清液，加水4ml稀释 加树脂2g，振摇5min后离心，取上清液 按照下表添加试剂和操作 　 空白管 标准管 正常管 照射管 水 1ml 标准液 1ml 正常尿 1ml 照射尿 1ml 硼酸缓冲液 1ml 1ml 1ml 1ml FDNB 0.1ml 0.1ml 0.1ml 0.1ml 56℃水浴15min HCl 1ml 1ml 1ml 1ml 水 5ml 5ml 5ml 5ml 三氯甲烷 5ml 5ml 5ml 5ml 取上层液体，用分光光度计测各管液体的吸光值，记录，并计算牛磺酸含量 实验结束，清洗试管、吸管，收拾好实验用品 结果与讨论 实验结果 吸光值测定 　 空白管 标准管 正常管 照射管 1 —— 0.305 1.01 1.255 2 —— 0.304 1.013 1.260 3 —— 0.305 1.012 1.255 平均值 —— 0.305 1.012 1.257 牛磺酸排出量： mg牛磺酸/24h 尿 =（样品读数/标准读数）*40*尿稀释倍数*24h尿总体积*10-3 照射管：1.257/0.305*40*40*1*0.001=6.59mg/L 正常管：1.012/0.305*40*40*1*0.001=5.78mg/L 2．结果讨论： （1）电离辐射增加机体蛋白质分解代谢。受照小鼠排除尿液中牛磺酸含量明显增高。牛磺酸是体内氨基酸代谢产物。小鼠受照后蛋白质分解代谢增强显著，主要是由于许多蛋白质水解酶活力增加，如照射后由于溶酶体被破坏，组织蛋白酶释放，活性明显增加，促使细胞内和细胞外蛋白质分解增加。同时，照射后机体摄取食物减少，加强了蛋白质分解代谢，释放大量游离氨基酸。一部分生糖氨基酸通过糖异生的作用转化为葡萄糖，一部分代谢为尿素或其他非蛋白氮，整个机体处于负氮平衡状态。尿中氨基酸及其代谢产物如牛磺酸、肌酸、尿素等排出量增加。 （2）三氯甲烷是萃取剂，将处理后尿液中的其他杂质萃取出来，使其不影响实验结果。 （3）电离辐射降低机体蛋白质合成。电离辐射对蛋白质生物合成有影响，有的被激活，有的被抑制，有的呈双向变化，即先抑制后增强。在血清蛋白方面，照射后血清白蛋白和γ球蛋白含量下降，而α和β球蛋白含量升高。虽然血清蛋白质成分有升有降，但蛋白质的净合成量是下降的。 （4）电离辐射对生物大分子，DNA，RNA，蛋白质和酶都有损伤，当生物分子的损伤达到一定程度，损伤分子达到一定数量时，将会导致细胞或组织器官的损伤。 放射医学实验报告