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微生物培养基的制备及接种 宿舍：628 成员：黄朋朋、李厅、王冲、马浩、王萌、 王锦楼 实验原理： 牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，这种培养基含一般细菌生长繁殖所需要的最基本营养物质，培养基含有碳源、氮源、磷酸盐、维生素、生长因子等。 在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。多用于培养细菌因此要用烯酸和稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。 实验器材： 试剂：牛肉膏1.8g、蛋白胨6g、食盐11g、琼脂12g、水600ml、1mol/L NaOH、1mol/L HCl 仪器或其他用具：试管56/个、1000ml大烧杯/个、三角瓶、量筒、玻璃棒、培养基分装器、分析天平、牛角匙、pH试纸、牛皮纸、记号纸、麻绳、纱布、培养皿、高压式蒸汽灭菌锅等。 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌种。 实验步骤： 称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 溶解： 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在 HYPERLINK /view/1021.htm \t _blank 石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。配制 HYPERLINK /view/1368084.htm \t _blank 固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 调pH： 在未调pH前，先用 HYPERLINK /view/4202954.htm \t _blank 精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7．6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。 分装： 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内,每试管10ml。如图： 注：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。 加棉塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。如图： 包扎： 　 HYPERLINK /view/241306.htm \t _blank 加塞后，将全部试管用麻绳捆扎好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、日期。 7、灭菌： 将培养基放入高压蒸汽灭菌锅后，加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸气锅密闭，勿使漏气。加热，0.103Mpa,121℃并维持压力至所需时间20min，取出。 倒置斜面： 将灭菌的试管培养基冷至50℃左右，将试管棉塞端搁在玻棒上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。如图： 无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 无菌接种： 如图： 注意：①以上操作必须在无菌的环境下进行即酒精灯的火焰辐射范围内 ②用接种环应充分灼烧 ③挑取少量菌种在试管斜面上轻轻由管底到管口划波浪线 ④塞好棉塞 培养： 将已经接种的培养基试管上贴上标签，注明接种的菌名，日期，将培养基于28~30℃下培养2~3d后观察待用。