微生物综合实验设计方案4.docVIP

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微生物综合实验设计方案4

微生物综合实验设计方案 第八小组 (曹婉仪 蔡楚萍 贝锦涛 张韵红) 取样 取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶,于华师校园内湖中取水样。为使取样具有代表性和全面性,分别选取三个取样点,取样点1:湖的东面,取样点2:中间湖边,取样点3:湖的西面,分别编号1.2.3,于水面以下10cm,取水各100mL,盖好瓶塞。 器具:三角瓶*3个 二、测水体pH值 为了大致地确定水体微生物的生长适宜pH(个人感觉这说法有点奇怪,好像暗示测出来的pH就是适宜生长的pH似的,至少改为:为了了解华师湖水的pH吧,或者改为其他更好的说法),取好水样后,分别用pH计测量三个水样的值,每个水样各测量三次,取平均值。 将三个水样混合均匀,得到混合水样,用pH计测量pH三次,取平均值。 器具:pH计 分离提纯2种微生物 1、材料:混合水样 2、方法 操作名称 具体步骤 试剂和材料 器具(经高压蒸汽灭菌) 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL 1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL,分装于两个三角瓶 2、高压蒸汽灭菌 (灭菌材料:250ml三角瓶*5,培养皿*16,试管*11,1ml移液管*5,10mll量筒*1) 3、倒16个平板 4支试管斜面(按原来写的也要13个平板,怎么会是10个,而且还没有设置对照的平板;如果要作×10000,还要更多平板。我觉得做15~20个平板比较好。 NaCl 2g 蛋白胨4g 牛肉膏1.2g 400mL水 1mol/LNaOH 1mol/L HCI (pH7~7.6) 高压蒸汽灭菌锅 天平 玻璃棒 500ml大烧杯*1个 250ml三角瓶*2个 封口膜*2张 绳子*2条 培养皿16套 试管*4个 胶塞/棉塞*4个 报纸多张 稀释涂布分离微生物 1、取0.2ml混合水样进行稀释,设置四个梯度:原液、×10、×100、×1000,分别装于4个试管中,标明稀释度,每种稀释度5ml2、涂布8个平板 3、37℃恒温培养箱中倒置培养24h 混合水样 蒸馏水 空白平板*8个 恒温培养箱 1ml移液管*5个 10ml量筒 试管*4个酒精灯 酒精棉球 涂布器 标签纸 平板划线分离微生物 1、选取稀释涂布平板操作中分离程度较好的两种微生物的平板菌落,进行平板划线,各划线2个平板 2、37℃恒温培养箱中倒置培养24h 涂布分离的平板 空白平板*4个 恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 平板划线分离微生物 1、两种微生物均选取划线操作效果好的菌落,进行第二次平板划线操作,各划线2个平板 37℃恒温培养箱中倒置培养24h 第一次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白平板*4个 恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 平板菌种接种到试管保藏 1、用接种环把菌种接种到试管斜面,每个菌种接种2个斜面 2、37℃恒温培养箱中培养24h 3、待菌种在固体斜面培养基上生长丰满后,注明菌类或菌种名、保藏日期、保藏人,然后置于4~8℃的冰箱中保存 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白斜面培养基*4个 恒温培养箱 冰箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 四、革兰氏染色 细菌的革兰氏染色 1.实验材料 1.1材料 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 1.2试剂: 无菌水、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红 1.3器具 载玻片、接种环、酒精灯 2.实验方法 步骤序号 操作名称 操作方法 1 制片 ①涂片:滴1滴无菌水于载玻片,挑取少许菌体与水滴均匀混合 ②干燥:火焰上方略加温 ③固定:用加热法,通过火焰3次 2 染色 结晶紫初染1min,水洗;碘液媒染1min,水洗;95%乙醇脱色20~30s,水洗;番红复染1min,水洗 3 镜检 显微镜油镜观察 五、观察细菌的形态特征 在高倍镜和油镜下观察细菌形态,拍下照片,画图,描述形态特征 器具:显微镜 六、生理生化试验(淀粉水解、糖酵解) (1)淀粉水解实验 操作名称 实验方法 接种 以无菌操作技术,把两个菌种接种到同一个平板上,划成“+”字形,平板的一边接一个种 培养 在平皿底部做好记号,盖上盖,37℃恒温培养箱中倒置培养24h 检验 平皿盖打开,滴加卢卡氏碘液于接种处 记录结果 有水解圈:淀粉水解实验阳性,用+表示;无水解圈:淀粉水解实验阴性,用-表示 (2)糖酵解实验 1 实验材料 1.1实验材料 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个、空白平白*1个、试管*5个 1.2实验试剂 卢卡氏碘液, 葡萄糖发酵培养基试剂[蛋白胨0.1g,NaCl 0.25g, K2HPO4 0.01g,水 50ml,溴麝香草酚蓝(1%水溶液) 0.15ml,葡萄糖 0.5g] 1.3实验器具 恒温培养箱、酒精灯、酒精棉球、接种环、标签

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