微生物综合实验设计方案5.docVIP

微生物综合实验设计方案 第八小组 （曹婉仪 蔡楚萍 贝锦涛 张韵红） 取样 取三个经高压蒸汽灭菌的锥形瓶，于华师校园内湖中取水样。为使取样具有代表性和全面性，分别选取三个取样点，取样点1：湖的东面，取样点2：中间湖边，取样点3：湖的西面，分别编号1.2.3，于水面以下10cm，取水各100mL，盖好瓶塞。 器具：三角瓶*3个 二、测水体pH值 为了大致地确定水体微生物的生长适宜pH，取好水样后，分别用pH计测量三个水样的值，每个水样各测量三次，取平均值。 将三个水样混合均匀，得到混合水样，用pH计测量pH三次，取平均值。 器具：pH计 分离提纯2种微生物 1、材料：混合水样 2、方法 操作名称 具体步骤 试剂和材料 器具（经高压蒸汽灭菌） 配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL 1、配置牛肉膏蛋白胨固体培养基400mL，分装于两个三角瓶 2、高压蒸汽灭菌 灭菌材料：250ml三角瓶*5，培养皿*16，试管*11，1ml移液管*5 3、倒16个平板 4支试管斜面 NaCl 2g 蛋白胨4g 牛肉膏1.2g 400mL水 1mol/LNaOH 1mol/L HCI (pH7~7.6) 高压蒸汽灭菌锅 天平 玻璃棒 500ml大烧杯*1个 250ml三角瓶*2个 封口膜*2张 绳子*2条 培养皿16套 试管*4个 胶塞/棉塞*4个 报纸多张 稀释涂布分离微生物 1、取0.2ml混合水样进行稀释，设置四个梯度：原液、×10、×100、×1000，分别装于4个试管中，标明稀释度，每种稀释度5ml2、涂布8个平板 3、37℃恒温培养箱中倒置培养24h 混合水样 蒸馏水 空白平板*8个 恒温培养箱 1ml移液管*5个 10ml量筒 试管*4个酒精灯 酒精棉球 涂布器 标签纸 平板划线分离微生物 1、选取稀释涂布平板操作中分离程度较好的两种微生物的平板菌落，进行平板划线，各划线2个平板 2、37℃恒温培养箱中倒置培养24h 涂布分离的平板 空白平板*4个 恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 平板划线分离微生物 1、两种微生物均选取划线操作效果好的菌落，进行第二次平板划线操作，各划线2个平板 37℃恒温培养箱中倒置培养24h 第一次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白平板*4个 恒温培养箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 平板菌种接种到试管保藏 1、用接种环把菌种接种到试管斜面，每个菌种接种2个斜面 2、37℃恒温培养箱中培养24h 3、待菌种在固体斜面培养基上生长丰满后，注明菌类或菌种名、保藏日期、保藏人，然后置于4~8℃的冰箱中保存 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 空白斜面培养基*4个 恒温培养箱 冰箱 酒精灯 酒精棉球 接种环 标签纸 四、革兰氏染色 细菌的革兰氏染色 1.实验材料 1.1材料 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个 1.2试剂： 无菌水、结晶紫、碘液、95%乙醇、番红 1.3器具 载玻片、接种环、酒精灯 2.实验方法 步骤序号 操作名称 操作方法 1 制片 ①涂片：滴1滴无菌水于载玻片，挑取少许菌体与水滴均匀混合 ②干燥：火焰上方略加温 ③固定：用加热法，通过火焰3次 2 染色 结晶紫初染1min，水洗；碘液媒染1min，水洗；95%乙醇脱色20~30s，水洗；番红复染1min，水洗 3 镜检 显微镜油镜观察 五、观察细菌的形态特征 在高倍镜和油镜下观察细菌形态，拍下照片，画图，描述形态特征 器具：显微镜 六、生理生化试验（淀粉水解、糖酵解） （1）淀粉水解实验 操作名称 实验方法 接种 以无菌操作技术，把两个菌种接种到同一个平板上，划成“+”字形，平板的一边接一个种 培养 在平皿底部做好记号，盖上盖，37℃恒温培养箱中倒置培养24h 检验 平皿盖打开，滴加卢卡氏碘液于接种处 记录结果 有水解圈：淀粉水解实验阳性，用+表示；无水解圈：淀粉水解实验阴性，用-表示 (2)糖酵解实验 1 实验材料 1.1实验材料 第二次划线分离的不同菌种的平板*2个、空白平白*1个、试管*5个 1.2实验试剂 卢卡氏碘液, 葡萄糖发酵培养基试剂[蛋白胨0.1g,NaCl 0.25g, K2HPO4 0.01g,水 50ml,溴麝香草酚蓝（1%水溶液） 0.15ml，葡萄糖 0.5g] 1.3实验器具 恒温培养箱、酒精灯、酒精棉球、接种环、标签纸 2 实验方法 操作名称 操作方法 配置糖发酵培养基 配置葡萄糖发酵培养基50ml,分装5支试管中，高压蒸汽灭菌 接种 取葡萄糖发酵培养基试管3支，分别接入两种菌种，用标签纸标明菌类或菌名、发酵培养基名称，第3支不接种，作为对照。接种后，轻摇试管，使混合均匀 培养 37℃