大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)ELISA试剂盒说明书.docVIP

大鼠分泌型磷脂酶A2(sPLA2)酶联免疫试剂盒 使用说明书 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定血清、血浆或其它相关生物液体中含量。 实验原理 HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的sPLA2呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 酶板：一块（96孔） 标准品（冻干品）： 2瓶，临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟，反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为0 pg/ml，做系列倍比稀释注：不要直接在板中进行倍比稀释，分别成0 pg/ml，0 pg/ml，，5，25 ，5 pg/ml，，样品稀释液直接作为如配制0 pg/ml标准品：取0.5ml 不要少于0.5ml 0 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 稀释液：1×20ml。 检测稀释液A：1×10ml。 检测稀释液B：1×10ml。 检测溶液A：1×120 /瓶（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释如10 检测溶液A990检测稀释液A，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。 检测溶液B：1×120 /瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 底物溶液：1×10ml/瓶。 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 终止液：1×10ml/瓶（2 H2SO4）。 覆膜：5张 使用说明书：1份 自备物品 酶标仪（建议仪器使用提前预热） 微量加液器及吸头，EP管 蒸馏水或去离子水，滤纸 标本的采集及保存 血清：全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000g离心20分钟，取上清即可检测，-20或-80保存，但应避免反复冻融。 1000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清-20或-80保存，但应避免反复冻融。 其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，-20或-80保存，但应避免反复冻融。 注：以上标本均应密封保存4保存应小于1周，-20不应超过1个月，-80不应超过2个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，各试剂均应平衡至室温试剂不能直接在37溶解；试剂或样品时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加标准品或待测样品100，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37。为保证实验结果有效 性，每次实验请使用新的标准品溶液。 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100（配制），酶标板加上覆膜37温育1小时。 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。 每孔加检测溶液B工作液（配制）100，加上覆膜37温育1小时。 弃去孔内液体，甩干，洗板5次， 6、 每孔加底物溶液90，酶标板加上覆膜37避光显色（30分钟，标准的前3-4孔有明显的梯度色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。 每孔加终止溶液50，终止反应，此时色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。立即用酶仪在450nm波长测量各孔的光密度（值）。 注： 试剂准备：所有试剂在使用前室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内。 3、 温育：为防止样品蒸发，时将加上盖或覆膜板于湿盒内，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态同时应严格遵守给定的时间和温度。 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液检测溶液B工作液请依据所需的量配使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确标准品及工作液，尽量不要微量（如吸取检测