意大利橄榄油厂废水中分离出可降解酚类物质酵母.ppt.pptVIP

三、实验结果 废水的理化鉴定结果 可降解酚类物质的酵母的筛选 筛选酚类降解能力强的菌种 氮源和温度对多酚类物质降解的影响 2、可降解酚类物质的酵母的筛选 4.氮源和温度对多酚类物质降解的影响 小结 橄榄油厂的废水分离出的C. boidinii (strain 682) 和 P.holstii (strains 625, 642, 647, 941) 可用于污水中酚类物质的降解。但需要进一步研究，以便找到可以降解全球性污水中多酚物质的方法。 * * APPLIED MICROBIOLOGY BIOTECHNOLOGY (2010) 87:2345–2354 组员：陈丽娜 高秋芬 Yeasts isolated from olive mill wastewatersfrom southern Italy: technological characterizationand potential use for phenol removal从意大利橄榄油厂废水中分离出可降解酚类物质的酵母 目录 一、研究背景 世界橄榄油的年常量为2.5×106吨，主要生产国有西班牙，意大利，希腊等国家。橄榄油的生产造成了大量废水的排出。 橄榄油在浸提工艺中会将酚类物质带入油中，在水溶解之后酚类物质被去除，造成了工厂的废水中含有酚类物质，同时废水中含有糖类、磷等。生产1吨的橄榄油就会排出0.5 吨的废水。 酚类物质是一种中等强度的化学毒物，其中以苯酚毒性最强。含酚废水是当今世界上危害大、污染范围广的工业废水之一，是环境中水污染的重要来源。这些废水若不经过处理，直接排放、灌溉农田则可污染大气、水、土壤，还会引发水体富营养化。 综上，利用微生物降解水中的酚类物质的研究显得很重要。 　 污水处理方法 1、处理污水的传统方法：蒸发沉降池 优点：减少了废水的体积 缺点：造成水的浪费，不能有效去除污染物，没有减少污水COD值和毒性。 2、新方法：生物修复 优势：减少污水的有机物含量，降低其变黑程度，去除酚类物质。 二、试验内容 1、废水的理化鉴定 2、菌种的鉴定及其酚类的代谢能力 a、表现型 b、基因型 c、酚类的代谢 3、确定混合菌种用以降解酚类物质 Fig. 1 Flow chart of strain isolation from OMW and characterizationfor application in OMW 1、废水的理化鉴定 测定污水的理化性质 pH值 还原糖（斐林试剂法） 蛋白质含量（考马斯亮蓝法） 酚类物质浓度（福林酚法） 菌体数目（镜检） 2、菌种鉴定及其酚类的代谢能力 菌群的表型鉴定 孢子的生成（镜检） 过氧化氢酶的活性（过氧化氢） 果胶水解活性（水解圈法） 木聚糖酶活性（水解圈法） 脂肪分解活性（水解圈法） 氮的同化作用（Delfini法） 基因型鉴定 PCR鉴定菌种的5.8S–ITS基因片段 限制性酶切（HaeIII）分析 酚类代谢能力鉴定 体外酚类降解实验初步分离能降解酚类物质的酵母菌； 将分离到的酵母菌接种在废水中培养，观察其生长状况。 3. 确定混合菌种用以降解酚类物质 第一步，分离出降解酚类物质能力最强的菌种 废水样品储存于-20摄氏度下。 每个试管中加16mL的污水，加107cfu/mL已获得的酵母悬浮液,在30℃下培养2天，以没有接种污水的为参照。 每天用福林酚法测定多酚类物质，结果用单因素方差和图基检测法检验。 第二步，将分离获得的五个菌株混合，研究温度和氮源对其降解多酚类物质的影响 菌株用麦芽膏液体培养，30℃ 24 h。 每管加入5mL培养液，在4℃，3000rpm下离心 15min，取菌体沉淀，用无菌0.9% NaCl溶液制成5mL悬浮液。 混合菌液的制备：每个菌种的悬浮液各取3mL，混合。 每个菌种在混合液中的浓度通过平板计数法确定。 在混合菌液中加入含有不同(NH4)2SO4 量的污水，在不同的温度下(10℃,15℃, 20℃, 25℃, 30℃)培养两天。 硫酸铵和温度的独立和相互作用性质通过两变量五水平的方法测定。（10个组合，平行实验两次） 多酚类物质用福林酚法测定。 1. 废水的理化鉴定结果 废水的初始酵母含量大约是6.0 log cfu ml?1，存放一段时间后会有不同程度的增加。 废水的初始pH约为5.5–5.8，一段时间后会轻微下降。 不同区域的废水样中还原糖的含量有很大差别，存放30天后几乎测不出还原糖。 不同区域的废水样中蛋白质含量也有差别，且其含量随着时间的推移有不同程度的增加。 多酚物质的含量在不同水样中有明显差别，30天后其含量有不同程度的降低。 图2.不同地区不同抽提方法排出的废水中苯酚的含量 400菌株 104菌株 2