花卉组培苗生产技术.docVIP

花卉组培苗生产技术规程 2 术语和定义 2.1 花卉 2.2 植物组织培养 2.3 花卉组培苗 2.4 植物生长物质 2.5 外植体 2.6 培养材料 2.7 培养基 2.8 接种 2.9 增殖 2.10 继代 3 生产设备（施）及化学试剂 3.1 生产设备（施） 3.1.1 建筑设施 3.1.2 生产设备 洗涤设备 灭菌设备 接种设备及工具 培养设备 实验设备 细胞学观察设备 3.2 常用化学试剂 3.2.1 洗涤剂 3.2.2 灭菌剂 3.2.3 无机盐类和有机物类 3.2.4 植物生长物质 细胞生长素：吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、2,4～二氯苯氧乙酸(2,4～D)等。 赤霉素：GA3等。 乙烯：C2H4。 3.2.5 碳水化合物 3.2.6 固化剂 3.2.7 培养基附加成分 mg/L～500mg/L、水解酪蛋白（CH）200mg/L～500mg/L以及腺嘌呤(ADE)1mg/L～80mg/L等。 4 消毒灭菌操作规程 4.1 洗涤室的消毒灭菌 4.2 接种室的消毒灭菌 min～30min，并定期(一般7d)用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸。 4.3 培养室的消毒灭菌 4.4 超净工作台的消毒灭菌 min～30min，并用70％酒精喷洒台面，或用新洁尔灭擦拭台面；定期清洗超净工作台过滤膜以保证过滤膜清洁。 4.5 培养基的消毒灭菌 min～20min即可。 4.6 接种器具的消毒灭菌 4.7 污染的瓶苗消毒灭菌 5 培养室环境调控 5.1 温度 5.2 湿度 5.3 光照 6 组培苗生产操作规程 6.1 培养基的配制 6.1.1 培养基选择 6.1.2 母液的配制和保存 母液的配制 mg/ml～1.0mg/ml，植物生长物质的配制方法见附录B。 母液的保存 6.1.3 培养基配制程序  6.2 培养材料及消毒 6.2.1 培养材料的选择和确定 6.2.2 外植体的消毒灭菌 ①茎尖、茎段及叶片等的消毒：70%酒精浸泡数秒钟，无菌水冲洗2次～3次，再用0.5%～2%的次氯酸钠浸泡10min～15min，用无菌水冲洗3次后接种； ②种子的消毒：70％酒精迅速漂洗一下，果实用2％的次氯酸钠浸泡10min，无菌水冲洗2次～3次后接种果实内的种子或组织；种子先用0.5％～2％的次氯酸钠浸泡20min～30min或用0.1％的升汞消毒0.5min～5min，用无菌水冲洗3次后接种。 ③根及地下部器官的消毒：0.1％～0.2％的升汞消毒5min～10min,或用2％的次氯酸钠浸泡10min～15min,然后用无菌水冲洗3次～5次后接种。 6.3 初代培养 6.3.1 初代（诱导）培养基 MS + 6-BA0.2mg/L + IBA0.02mg/L为花卉组培苗常用初代培养基之一。可以根据培养的植物种类、接种部位具体调整。 6.3.2 外植体的接种 6.4 组培苗的增殖与继代培养 6.5 组培苗生根 6.5.1　瓶内生根 　生根材料的选择 在 诱导生根 6.5.2　瓶外生根 　瓶内诱导瓶外生根 瓶外生根（微扦插） NAA、IBA或ABT生根粉（一般100ppm～800ppm）速蘸或浸泡，扦插到消毒后的无土基质中，基质多采用蛭石、草炭、珍珠岩或混合基质等。注意温度、湿度等环境条件，初期相对湿度要求高于90％，以后逐渐降低相对湿度在60％～80％之间。 6.6 组培苗炼苗移栽 6.6.1 组培苗炼苗 6.6.2 组培苗移栽 min后移栽到基质中。基质采用蛭石、草炭、珍珠岩或混合基质等。控制温度25℃±2℃，相对湿度前期80％～90％，以后逐渐降低湿度。当试管苗根系发达、形成侧须根以后，可以移栽到营养钵中，成为容器苗。 6.7 移栽苗管理 6.7.1 肥、水管理 6.7.2 病虫害防治 b) 加强通风，每隔7d喷一次广普性杀菌剂。 c) 一旦发现虫害、病害及时药物治疗。 附录A （资料性附录） 常用培养基成分表（单位：mg/L） Murashige 和 Skoog (MS) (1962) Gamborg (B5) (1968) (N6) (1975) Linsmaier 和Skoog （LS） (1965) Chee 和 Pool (C2D) (1980) (ASH) (1986) 曹孜义等 (GS) (1986) (NH4)2SO4 NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 NaH2PO4·H2O Na2HPO4 Ca(NO3)2·4H2O 1650 1900 440 370 170 134 2500 150 250 150 463 2830 166 185 400 1650 1900 400 370 170 1650 1900 370 170