DNA的提取和电泳实验报告.docVIP

基因组DNA的提取和电泳（实验五）实验报告 一、实验目的 了解DNA提取的方法，以及琼脂糖凝胶电泳分析DNA技术。 二、器材和试剂 1. 器材 水平琼脂糖电泳仪，离心机，水浴锅，研钵，离心管、移液枪、水稻幼苗等 试剂 1mol/L Tris.Cl(pH8.0) 的配制：称取12.11g 的Tris，置于80 mL的ddH20,加入浓盐酸（约4.2 mL）,调节pH值至8.0，定容至100 mL。 2. 0.5 mol/L EDTA(pH8.0)的配制：18.61g Na2EDTA·2H2O，加入80 mL的ddH2O,用NaOH颗粒调pH值至8.0（约需2 g），定容至100 mL。 3. 提取缓冲液的配制： 100 mmol/L Tris.Cl(pH8.0), 20 mmol/LEDTA, 500 mmol/L NaCl, 1.5%SDS 4. 80/4/16氯仿：异戊醇：乙醇 5. 6?Loading buffer：0.15％溴酚蓝，0.15％二甲苯青FF，5 mmol/L EDTA，50％甘油 6. 5×Tris-硼酸（TBE）缓冲液 成分及终浓度 配制1L溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 三、实验步骤 在15mL的离心管中加入5mL的提取缓冲液，60℃水浴预热。 植物叶1-2g，剪碎，在钵体中加入石英砂，加入预热的提取缓冲液，磨成粉末状，60℃水浴保温20 min，其间不时缓慢摇动。 5000 rpm离心5分钟，仔细吸取上清液至另一离心管中， 加入5 mL 氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀（需带手套，防止皮肤损伤），室温下静置5-10分钟，使水相和有机相混匀。 室温下离心5000 rpm离心5分钟。 仔细吸取上清液至另一离心管中，加入一倍体积异丙醇，混匀，室温下放置片刻即出现絮状沉淀。 离心5000 rpm，离心5 min，弃去异丙醇，室温晾干。 视沉淀多少，加入1mL左右ddH2O溶解，可在60℃水浴中放置15分钟以上助溶。 取DNA样品5 μL，加入1 μL6?Loading buffer，混匀，加入0.7%的琼脂糖凝胶加样孔中，电泳，检测DNA的分子大小。 实验结果和讨论 实验分析：本次实验由于种种原因我是和植保102班的同学一起做的，我们组3人，实验过程比较严谨，受到了老师的表扬，实验结果也很令人满意。 下面是实验过程中的注意点：1、研磨不能太久太用力，会导致DNA片段断掉。2、实验室的某些试剂，如氯仿，有毒性，应带手套进行。 电泳的时候不知是时间的原因还是都做得不错，结果相差不是很远（如上图），第五组和第六组是我们的，第六组是我自己加的。实验过程中要耐心细心，这样才能得到满意的结果。 园艺101 石颖 20100107011