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实验三 乳品中乳糖含量的测定-比色法 食品科学与工程 林倩芸 2013.3.20 1 实验目的 (1)了解比色法测定乳品中乳糖含量的基本原理。 (2)掌握比色法测定乳糖含量的操作方法。 2 实验原理 牛乳或乳粉样液经沉淀剂澄清后，样液中的乳糖在苯酚、氢氧化钠、苦味酸和硫酸氢钠的作用下，生成橘红色的络合物。在波长520nm处具有最大的吸收波长，颜色的深浅与乳糖含量成正比，由标准乳糖含量可以计算出样液中乳糖含量。 3.1仪器 分光光度计、离心机； 3.2试剂 (1)沉淀剂：4.5%氢氧化钡、5%硫酸锌溶液 (2)发色剂：由1%苯酚、5%氢氧化钠、1%苦味酸、1%亚硫酸钠溶液按体积比1:2:2:1配成，保存于棕色瓶中，24h内有效 (3)乳糖标准溶液：称取含有结晶水的乳糖1.025g或经100摄氏度烘至恒重的乳糖1g，用水溶解并定容至1L。此时乳糖含量为1g/L 4 实验步骤 (1)精确称取0.1002 g乳粉，用水溶解后移入100ml容量瓶中，定容； (2)吸取2.5ml稀释样液，移入离心管； (3)加入5%硫酸锌2ml，4.5%氢氧化钡0.5ml，混合均匀； (4)配平后以2000r/min转速离心2min，取上层澄清液为样品进行测定； (5)取7个试管进行标号，7个25ml容量瓶标号（0-6号），按下表加入试剂： 试管号 水/ml 标准溶液/ml 上清液/ml 发色剂/ml 0 2 0 0 2.5 1 1.6 0.4 0 2.5 2 1.2 0.8 0 2.5 3 0.8 1.2 0 2.5 4 0.4 1.6 0 2.5 5 0 2 0 2.5 6 0 0 2 2.5 (6)将试管封口，在沸水浴中准确加热6min后取出，立即冷却至室温；若6号管仍有沉淀需再次离心； (7)将试管中液体按对应标号转移到25ml的容量瓶中， 用水稀释至刻度； (8)将定容好的样液置于520nm波长下测定吸光度值，记录数据。 5 实验结果与分析 数据记录与计算： 试管号 0 1 2 3 4 5 6 吸光度值 0 0.053 0.129 0.204 0.267 0.342 0.118 将6号管的吸光度带入线性方程得X=0.7475，以此计算得的乳糖含量为37.38%。 分析：从得到的线性方程来看，相关性还是较好的，但是在舍去（0,0）的前提下，方程偏离原点较多，所以可见整体吸光度的测量偏大。从实验中可见一般，离心时间不够，溶液不澄清，导致吸光度都显大，虽然结果可以，但是偶然性太大。 6 实验讨论 (1)本法在0．2~2．Omg乳糖范围中呈良好的线性关系，适用于牛乳，乳粉和酪蛋白乳糖中乳糖的测定。样如果有蔗糖、乙醇等存在，也不影响测定结果。