饲料中木聚糖酶活性测定_.docVIP

东莞泛亚太生物科技有限公司 研发方案 实验目的： 测定颗粒饲料中木聚糖酶活性，考察饲料调质制粒过程中对木聚糖酶活性的影响。 试验方案 ⒈、饲料中木聚糖酶活性标准曲线的制作 根据饲料中添加木聚糖酶含量，配制梯度浓度木酶的标准酶液A； 空白饲料样品：从饲料厂取粉碎粒度均匀的适量未加酶制剂饲料样品，包括粉料和颗粒料，分别在调质前进料口（未接触蒸汽）、调质出口和制粒后的颗粒料取样，每个点取样本数不低于4个，且取样时间都控制在饲料混合均匀的中间阶段； 空白饲料样品加酶后处理：称取7 份空白饲料样品，先粉碎，（约3～4g，须预实验进一步确定保证其吸光度在0.300左右），然后加入木酶缓冲液振荡混合15min，然后依次加入6份不同体积的酶液A（其中一份饲料原料不加入酶液A），定容，摇匀，离心得到上清酶液； 空白饲料样品及加酶后样品的还原糖含量OD540值测定：参照APAC实验室木酶检测方法，测定[3]中上清液的OD540吸光值； 标准曲线的绘制：以OD540值为横坐标,以0.2ml上清液中所含木聚糖酶活力（U/g） 为纵坐标 Y，绘制 OD 值-酶活梯度曲线。 空白：以0.20ml缓冲液替代0.2ml上清液，其它操作步骤同上。 ⒉ 调质制粒饲料中木聚糖酶活性的测定 制备木聚糖酶单酶样品30000U/g，运用APAC实验室检测方法先测定木聚糖酶酶活； 在饲料中添加200g木聚糖酶样品，样品用玉米粉(40目)逐级稀释至20kg，再与其他原料混合（因此，要求预混料中没有酶制剂，这步骤要与兴业协商），并且饲料配方组成及原料要最大程度与上述1[2]的空白饲料样品一致； 分别在调质前进料口（未接触蒸汽）、调质出口和制粒后的颗粒料取样， 每个点取样本数不低于4个，且取样时间都控制在饲料混合均匀的中间阶段； 称取3中的加酶饲料（添加木聚糖酶），先粉碎，加入木酶缓冲液定容、振荡15min、离心取上清。随后参照标准曲线制作方法测其吸光值，并根据标准曲线计算得出其酶活； 根据不样品的酶活性结果计算调质、制粒过程中对酶活性的损失率。 取样点注意 为了考虑饲料加工各个阶段对酶活的影响，故不同加工时段的梯度曲线可能会有所不同，故需调质前、调质后及颗粒成品的不加酶和加酶饲料各4-5份份，均500g左右，同时保证加酶饲料需采用上述同批次未加酶饲料配制而成； 注:用玉米+矿物添加剂来代替全价饲料,用完后可以当作玉米重新粉碎来使用. 为了试验的准确性，加入酶制剂的种类和批号日期需进行记录，方便以泛亚太实验室检测酶活为参照； 调质、制粒参数：记录蒸汽压力、调质温度和调质时间；兴业提供制粒的环膜压缩比，环膜孔径。