药敏试验(扩散法)操作方法剖析.ppt

药敏试验（扩散法）操作方法 河南康星畜禽疫病诊断中心 马长宇内容: 一、药物敏感试验的目的与意义 二、常用的药敏测定方法 三、试验准备及用品 四、药敏试验操作步骤 五、结果观察 六、影响药敏结果的因素 一、概念 抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。 （1）MIC：体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度，临床医师可以根据MIC确定药物剂量。通常达到稳态的血药峰浓度（Css）max应为MIC的4-8倍，重症感染以大于8倍为妥。 （2）为方便临床给药，根据MIC提供一个定性的结果是必要的。临床医师根据敏感、中介、耐药的提示结合MIC可以方便地制定用药方案。 敏感（S）：表示该药物对细菌的MIC值低于常规剂量下的抗菌 药物血液浓度或组织浓度4-8倍，可以用常规剂量治愈。 中介（I）：表示该药物对细菌的MIC值接近于常规剂量给药后的血药浓度或组织药物浓度，细菌对该药的敏感性降低，但仍可用于生理性浓集部位的感染或使用高剂量药物进行治疗（注：必须考虑高剂量的安全性）。 耐药（R）：表示该药物对细菌的MIC值等于或高于常规剂量下药物的血液浓度或组织浓度，细菌不能被该种药物抑制。 意义： 1、检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。避免盲目用药、滥用药、大剂量用药。 2、监测耐药性，分析耐药菌变迁，了解某一地区致病菌的耐药变迁、流行病学调查及监控，控制和预防耐药菌株的流行 3、为经验用药提供所选药物的参考依据，可预测抗菌治疗的效果。“敏感”治疗可能有效；“耐药” 肯定失败 4、新抗菌药的研究 以下情况不需进行药敏测定： 标本污染细菌，非致病菌引起 已知某些抗菌药对某菌有良好的抗菌作用且很少有耐药菌产生 已知细菌全部耐药的药物 对营养要求高而不易生长的细菌 二、常用的药敏测定方法 1、扩散法：纸片法、牛津杯法、打孔法等。 纸片法 手工测试的方法，通过测试药物纸片在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。目前临床上广泛使用此法。定性 2、稀释法：琼脂稀释法、液体稀释法（试管、微量） 通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度（MIC）。自动化仪器均采用液体稀释法为药敏试验的方法。 定量 3、E测定法（E test）： 与扩散法相似，但药物包被于长塑料条上，能够精确测定MIC值。适于一些特殊病原菌的药敏测试，但价格较为昂贵。 4、全自动药敏仪法： 三、试验准备及用品 药品（单品药、药厂的成品药、中药）、恒温培养箱、药敏片、培养基、平皿（直径90mm）、烧杯、蒸馏水、滤纸、打孔器（文具店有售）、 0.5麦氏比浊管配制方法： 0.048M BaCL2 (1.17% W/V BaCL2.2H2O) 0.5ml 0.36N H2SO4 (1%, V/V) 99.5ml 将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。 1、培养基 操作步骤： 1、玻璃器皿的准备 冲洗、包裹、灭菌、干燥 2、记量、称取原料 3、加热溶解 4、校正PH值 5、灭菌 6、分装、包裹、备用 2、药敏片 1、单药（一种成分） 市场生化试剂店有售，也可自制。但含量及监测标准有严格界定。建议购买 2、成药（复方成分） 多种联合的抗菌药物制剂应以其成分中某种含量最高的抗菌药物为标准稀释成有效浓度。但多数厂家由于产品配方机密，多按产品用量进行配制。药敏片可由厂家提供，也可自制。 3、中药草药 将中药研成粉未，1克加适量的水充分浸泡煮沸,滤液除去杂质后浓缩成1毫升,过滤、高压灭菌后加入100张纸片干燥备用。 制作步骤： 1、纸片的准备 2、药液的配制 3、抗菌药敏纸片制作 简易药敏片的制法 纸片的准备： 1、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸药片吸水量为0.01ml。 药液的制备（用于商品药的试验）： 按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1g兑水1L，配制药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏片所用的药液浓度。 抗菌药的稀释剂通常用纯化水。 说明： 不同厂家标示成分及含量相同的成品制剂在用成品