学《菊花的组织培养》剖析.ppt

专题3 植物组织培养技术 课题1 菊花的组织培养 1.了解植物组织培养中各阶段的变化 2.了解影响植物组织培养的因素 3.理解植物组织培养的基本原理和基本技术 以视频为背景材料，设计问题，导入新课介绍组培的优越性；接着直接阐明植物组织培养的基础知识和原理，再讲授组织培养的操作过程和注意事项。结合形象的图片，使内容呈现更为清晰明了；通过结果分析和课题延伸，完善内化课堂知识。 通过添加典型实例，结合情景图片设置相关问题，层层深入，以此来突破无菌操作流程这一重点内容；组织培养的基本操作过程，是本节内容的难点，结合图示，设计问题，并总结规律，由此突破这一难点内容。 组织培养简介 植物组织培养:是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织及细胞进行培养，使其再生完整植株的技术。 一、组织培养的基础知识 （1）细胞的分化： 在个体发育过程中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 1.相关概念 （2）细胞的全能性： 已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能 （3）外植体： 离体的器官、组织、细胞 （4）愈伤组织： 细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞 （5）脱分化： 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，也叫去分化 （6）再分化： 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程 2.植物组织培养条件 原理: 细胞的全能性 细胞离体 必要条件 一定的营养物质、激素和其他外界条件 适宜条件 植物激素 无机盐 糖类 无菌、温度、光照… 离体 3.影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 A、植物材料的选择直接关系到实验的成败 （2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相 对特殊，需配置适宜的培养基 MS培养基主要成分包括： A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等 C、有机物、植物激素 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤 霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） （3）植物激素的影响 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率高 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的分化 生长素 细胞分裂素： ＝ 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 4.植物组织培养过程 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 植物细胞培养 不需要光 需要光 （1）培育无病毒植株 （2）培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） （4）基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 5.植物组织培养的应用 （3）诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1.选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2.消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ②