液相色谱法剖析.ppt

第四节 经典液相色谱法 液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。 一、液-固吸附色谱 （一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）吸附剂和流动相的选择 （一）分离原理 各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的 吸附能力差异而实现分离 （二）常用吸附剂：多孔、微粒状物质 1. 硅胶 2. 氧化铝 3. 聚酰胺 4.活性碳 5.大孔吸附树脂： 1. 硅胶（SiO2·H2O） 结构：内部——硅氧交联结构→多孔结构 表面——有硅醇基→氢键作用→吸附活性中心 特性： 1）与极性物质或不饱和化合物形成氢键 物质极性↑，吸附能力↑→强极性吸附中心，不易洗脱 吸附活性次序：活泼型束缚型游离型 2）吸水→失活 →105～110OC烘干30分钟(可逆失水)→吸附力最大 →500OC烘干(不可逆失水)→活性丧失，无吸附力 续前 2. 氧化铝 碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 中性氧化铝 pH＞7.5 适于分析酸性碱性和中性物质 酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 3. 聚酰胺 氢键作用 氢键能力↑强，组分越后出柱 4.活性碳 非极性吸附机，吸附力强 水中吸附力强， 适合于水溶性的物质的分离 5.大孔吸附树脂 不含交换基团，大孔网状结构，不容于酸、碱及有机溶剂，水溶液中吸附力强。 （三）吸附剂和流动相的选择： 依据被测组分、吸附剂和流动相的性质 1. 被测组分性质（极性大小）： 烃＜ - - - - - - - - ＜羧酸，醇 2. 吸附剂的活性： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂 3. 流动相的极性： 流动相极性↑大，对被测组分的洗脱能力↑大 “相似相溶”原则 ：根据组分性质、吸附剂的活性，选择适当极性的流动相 流动相的选择三方面 1.被分离物质的结构、极性、与吸附力的关系 2.吸附型的活性与被分离的组分极性的关系 3.洗脱剂的极性与被分离组分极性的关系 1.被分离物质的结构、极性与吸附力的关系 一般极性规律（复习） 烷烃类吸附不牢固。当有官能团取代后极性发生变化。 不饱和烃共轭链越长，极性越强，吸附越强 母核相同，官能团极性越大越多极性越强，分子极性越大，吸附力越强。 空间排列，内氢键，吸附力减弱。 在同系物中，分子量越大，极性越小，吸附力弱，常见官能团极性小—大顺序： 烷＜烯＜醚＜硝基＜酯＜酮＜醛＜胺＜醇＜酚＜羧＜酸 2.吸附剂的活性与被分离组分极性关系 分离极性小的组分，吸附剂极性大，吸附性强，以免流出太快。 分离极性大组分，选吸附性能小的吸附剂。以免滞流。 3.洗脱剂的极性与被分离组分的关系 原则： “相似相溶” 常用溶剂的极性顺序： 醚＜环己烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯＜乙 醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜ 乙醇＜水 续前 4. 三者关系图示： 组分 吸附剂 流动相 极性 活性小 极性 非(弱)极性 活性大 非极性或弱极性 二、薄层色谱法 （一）概述 （二）定性参数 （三）吸附剂的选择 （四）展开剂的选择 （五）薄层板的制备 （六）定性与定量分析 （一）概述 1．定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程：见图示 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附（分配，离子交换，空间排阻） 4．特点：分析快速、灵敏、显色方便 5．应用：药物杂质检查、纯度测定 next 图示 图示 L0 （二）定性参数 1. 比移值Rf 续前 讨论 Rf与K有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板 和展开剂的性质有关 色谱条件一定，Rf只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为 续前 1）K↑大，Rf↓小