血涂片制备染色及白细胞形态剖析.ppt

血涂片制备、染色及白细胞形态观察 实验内容 1.血涂片制备 2.血涂片染色 3.正常白细胞形态观察 目的：掌握血涂片的制备方法、瑞吉氏染色方 法，观察正常白细胞形态。 染色原理：根据不同种类细胞及细胞的不同成分 ，对酸性及碱性染料结合能力不同， 而使各种细胞呈现各自的特点。 器材：载玻片、推片、染架、吸耳球、显微镜、 微量吸管、拭镜纸。 试剂：瑞吉氏染液、磷酸盐缓冲液、香柏油、 乙醇-乙醚溶液。 标本：抗凝血。 左手持载玻片，右手持推片，将推片置血滴前方，向后移动到接触血滴，使血滴沿推片边缘展开成线状。 1. 血 涂 片 制 备 血液充分抗凝。 微量吸管虹吸取血7-8μl，置血滴于载玻片一端。 推片与载片呈30°～40°角，向另一端匀速地推出。 血 涂 片 制 备 血 涂 片 制 备 推片 载玻片 血液 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 李四 B 1 2 3 2. 血 涂 片 染 色 再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴，Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置5分钟 直接在无血膜处流水冲洗3-5分钟 血涂片干燥后用油镜分类计数200个白细胞 李四123 涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟 1.玻片清洗：新玻片常有游离碱质,因此应用 清洗液或10%盐酸浸泡24h,然后再彻底清洗。用过的玻片可放入适量肥皂水煮沸20min,再用热水将肥皂和血膜洗去,自来水反复冲洗,必要时再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干备用。 2.使用玻片：只能手持玻片边缘,切勿触及玻片表面,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。 注 意 事 项 玻片 3.良好的血涂片,厚薄适宜,头体尾分明,分布均匀,边缘整齐, 两侧留有空隙。 血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。 4.血涂片干透后方可染色，否则染色过程中血膜容易脱落。血涂片制好后最好立即固定染色,以免细胞溶解和发生退行性变。 注 意 事 项 推片 5.H+影响细胞染色,配制染液必须用优质甲醇,稀释染液必须用缓冲液,近中性水冲洗,否则各种细胞染色反应异常,致使细胞的识别困难,甚至造成错误。 6.染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染液越淡、室温越低、细胞越多,染色时间越长或适当增加染液量。 7.染液不可过少,以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难冲洗干净。流水冲去染液,不能先倒掉染液,以免染料沉着于血涂片上。冲洗时间不宜过久，以防脱色。 注 意 事 项 染色 3. 血涂片的观察 低倍镜观察 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。 李四123 中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞 单核细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 中性杆状核粒细胞 正 常 细 胞 形 态 胞体：圆形，直径 10-15μm。 胞核：核形不一，呈S形、U形等，核凹陷程度大于核直径的1/2，核最窄径大于最宽径的1/3。核色质粗糙成块。 胞浆：胞质量丰富，充满浅红色中性颗粒。 中性分叶核粒细胞 体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分2-5叶。直径10-12μm 。 嗜酸性粒细胞 略大于嗜中性白细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成桔红色。直径10-15 μm 。 嗜碱性粒细胞 体积略小于嗜酸性白细胞，细胞中有大小不等被染成紫色的颗粒，颗粒数目较嗜酸性白细胞的颗粒少，核1-2叶，染成淡蓝色。直径10-11 μm 。 单核细胞 体积最大，细胞圆形。胞质染成灰蓝色。核呈肾形或马蹄形，染色略浅于淋巴细胞的核。直径14-20 μm 。 淋巴细胞 小淋巴细胞：与红细胞大小相似，圆形，核致密，染成 深紫色。周围细胞质嗜碱性，染成淡蓝。 大淋巴细胞：较大，核圆形。直径6-8 μm 。 细胞 形态 胞质着色 胞质内颗粒 细胞核型 中性杆 圆形 粉红色 量多 细小 均匀 紫红色 杆状 中性叶 圆