仪器分析HPLC剖析.ppt

4. HPLC发展前景—样品前处理方法 固相萃取 固相萃取 优点：同步实现富集和纯化 应用范围： 水中有机污染物的痕量富集、水中半挥发性有机物的测定及大气和土壤样品的前处理 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 分散液液微萃取 分散液液微萃取 特点： 有机溶剂用量少，富集倍数高 应用范围： 适用于水溶液中有机物的提取，如有机磷农药、酚类物质等。也可用于水溶液中重金属( 钯 钴 铅 钒 有机锡等)的萃取。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 固相微萃取： 在固相萃取基础上发展起来，采用一根聚合物涂层的熔融石英纤维，从样品基质中或样品上方的顶空气体中直接吸附萃取待测物，然后再色谱进样口解吸、分析。 优点： 所需样本量少,避免了乳化现象,回收率高， 重现性好,而且便于自动化操作。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 超临界流体萃取： 利用超临界流体的溶解能力与超临界流体具有与流体相近的密度和与气体相近的豁度，扩散系数为液体的10倍至100倍，对很多物质有较好的渗透性和较强的溶解能力。 优点： 提取过程快速、简便，消除有机溶剂对人体和环境的危害，并可与许多分析仪器联用。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 微波辅助萃取： 在微波中，由于吸收微波能力的差异使基体物质的某些区域或萃取习题的某些组分被选择性的加热，从而使样品中要分析的组分从样品基质中渗出，实现与基质的分离。 优点： 受溶剂亲和力影响小，设备简单，适用范围广，重现性好，节省时间和溶剂。 4. HPLC发展前景—样品前处理方法 浊点萃取： 以中性表面活性剂胶束水溶液的溶解性和浊点现象为基础，通过改变实验参数引发相分离，将疏水性物质与亲水性物质分开。 优点： 萃取率高、富集因子大、操作简便、安全、经济，便于实现联用。 4. HPLC发展前景—检测器 种类：紫外检测器(UV) 荧光检测器(FD)? 电化学检测器(ECD)? 蒸发光散射检测器(ELSD) 示差折光检测器(RID) 紫外检测器(UV) 原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比。 优点: a: 灵敏度高，检测下限约为 10-6 g／ml b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱 紫外检测器的类型: 　①固定波长型(已淘汰)； 　②可变波长型(最常用)； 　③二极管阵列检测器(必威体育精装版型)。 二极管阵列检测器（DAD） 时间、光强度和 波长的三维谱图 荧光检测器（FLD） 原理: 物质的分子或原子经光照射后，有些电子被激发至较高的能 级，这些电子从高能级 跃至低能级时，物质会发出比入射光 波长较 长的光，这种光称为荧光。 荧光强度(F)与激发光强度(I0)及荧光物质浓度(C)成正比。 优点： 灵敏度高、选择性好，是微量组分和体内药物分析常用的检测器之一。 荧光检测器（FLD）结构示意图 HPLC-FLD检测发霉的花生中的黄曲霉素B1和黄曲霉素B2 黄曲霉素B2 黄曲霉素B1 流动相：H2O :乙腈：甲醇 (60/20/20, v/v/v) 流速：1mL/min 柱温：25℃ 高效液相色谱法 化学化工学院 1.HPLC仪器结构及原理 注射器 进样器 高压泵 混合室 溶剂 预柱 接头 色谱柱 检测器 数据系统 根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异，因此在同一推动力作用下，不同组分在固定相中的滞留时间有长有短，从而实现分离的目的 1.HPLC仪器结构及原理 3.操作条件的选择—流动相的选择 流动相要求： (1)溶剂应当是高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性； (2)溶剂的性能与使用的检测器应当匹配；选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长，甲醇：205nm; 乙腈：190nm (3)溶剂对样品应有足够的溶解能力； (4)溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点； (5)尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。 常用流动相溶剂： 反向色谱常用流动相及冲洗强度 H2O甲醇乙腈丙醇异丙醇四氢呋喃 最常用组成：甲醇/ H2O 、 乙腈/ H2O 洗脱顺序：极性物质先洗脱下来 正想色谱常用流动相及冲洗强度 正乙烷乙醚乙酸乙酯异丙醇 洗脱方式—等度洗脱、梯度洗脱 等度洗脱： 整个洗脱过程中，流动相的组成比保持不变 梯度洗脱： 在一个分析周期中，按照一定的时间程序连续或阶段性的改变流动相的组成比，从而改变溶剂的极性、离子强度、pH值等，使每个组分在适宜的条件下获得分离。 梯度洗脱优点： 改善峰型；提高柱效；减少分