黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤作用机制及其临床意义探讨.doc

目  录  1 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 2 3  黄芩素对人肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤的作用 机制及其临床意义探讨 …………………………………… 1 中文摘要……………………………………………………… 1 英文摘要……………………………………………………… 3 前言…………………………………………………………… 6 材料与方法……………………………………………………11 结果……………………………………………………………24 讨论……………………………………………………………30 结论……………………………………………………………36 参考文献………………………………………………………37 英汉缩略词对照表……………………………………………41 致谢……………………………………………………………42 Survivin 及其剪接变体在肿瘤的形成中的作用（综述）…43 黄芩素对人肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤的作用及机 制及其临床意义探讨  摘  要  目的：通过将肝癌细胞株 SMMC-7721 接种于 BALB/C(n/n) 裸鼠腋窝皮下，复制人肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠皮下移植瘤模型， 观察黄芩素干预对 SMMC-7721 移植瘤组织结构、凋亡及侵袭和转移 的影响，并探讨其可能的机制，为黄芩素应用于临床提供实验依据。 方法：1.体外复苏、培养人肝癌 SMMC-7721 细胞，收集对数生长期 的肝癌细胞，将细胞浓度调整到 1.5×107/ml，将细胞细胞悬液接种裸 鼠腋窝皮下，每只裸鼠接种 0.2ml。待成瘤至长径约 0.8cm 时，对裸 鼠进行随机分组并对裸鼠进行编号。实验组裸鼠每天每只腹腔注射黄 芩素 20mg/kg，连续腹腔注射 14d。对照组每天每只腹腔注射二甲亚 砜（DMSO）（按黄芩素溶液浓度 5mg/ml 计算溶解黄芩素所需的 DMSO 的体积），连续腹腔注射 14d。末次用药后 24h 处死全部裸鼠， 充分暴露瘤体使之能被完全剥离，尽快用游标卡尺测量瘤体长径（a） 以及短径（b），瘤体积 V=（a+b2）/2；瘤体称重，抑瘤率按如下公 式计算：抑瘤率（Inhibition Ratio, IR）=（1－实验组瘤重/对照组瘤 重）×100％。将做 RT-PCR 组织放入经 0.1%DEPC 处理过并经高温高 压消毒的冻存管中-80冻存备用；将做 HE 染色及免疫组化的组织 用 4%中性甲醛固定备用。2.用免疫组化方法检测移植瘤内 Ezrin 及 1 Survivin 蛋白的表达。3.RT-PCR 检测移植瘤中 Ezrin 及 Survivin mRNA 表达情况。4.HE 染色光镜下观察移植瘤的组织结构。5.实验结果用 SPSS16.0 进行统计分析，以 P﹤0.05 视为具有统计学意义。 结果： 1.实验组肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤体积及重量均显著小于 对照组（P﹤0.05），抑瘤率为 20.80%±10.27%。 2.光镜观察，实验组 移植瘤可见较多均质红染的无结构区域；对照组可见癌细胞巢团状分 布，细胞有明显的异型性。 3.免疫组化结果示，实验组移植瘤中 Survivin、Ezrin 蛋白的表达水平与对照组相比明显下调（P﹤0.05）。 4.RT-PCR 结果示，实验组移植瘤 Survivin、Ezrin mRNA 表达水平与 对照组相比明显下调（P﹤0.05），结果与免疫组化结果一致。结论： 1.实验组肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤体积和重量都明显小于 对照组，说明黄芩素对肝癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤的生长有 抑制作用。2. 黄芩素可能下调 Survivin、Ezrin mRNA 和蛋白在人肝 癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤中的表达。3.黄芩素下调 Survivin 的表达降低了 Survivin 对凋亡的抑制作用，从而促进了肝癌细胞的凋 亡。黄芩素下调 Ezrin 的表达从而抑制了其促进肝癌细胞的侵袭和转 移的能力。4.黄芩素有望成为临床治疗肝细胞癌的高效低毒药物。 关键词：黄芩素；原发性肝癌；裸鼠移；植瘤；生存素；埃兹蛋 白；凋亡 2 Explore the Role and Mechanism of Baicalein on SMMC-7721 Cell Line Xenografts in Nude Mice and Its Clinical Significance Abstract: Objective: The effect and its potential mechansim of baicalein on the histologic