实验1细菌形态学检查.ppt

细菌形态学检查 试验一 1、常用显微镜的使用 2、不染色标本检查 3、细菌涂片制作、革兰染色和细菌基本形态观察 1、常用显微镜的使用 目的要求 1、掌握普通光学显微镜油镜的使用和保护。 2、熟悉普通光学显微镜的结构及各部分的功能。 普通光学显微镜的基本结构和功能 光学放大系统：目镜、物镜、聚光器、 光源等 组成： 机械系统：镜筒、物镜转换器、镜台、 镜臂、底座 物镜 显微镜的光学部分 作用：放大物象 镜头上标有放大倍数 有低倍物镜、高倍物镜、油镜三种 目镜 显微镜的光学部分 作用：放大物象 镜头上标有放大倍数 使用油镜的原理 对于个体微小，用高倍镜仍观察不清的微生物，则必须使用油镜。使用时，需要在标本和物镜间加入一种镜头油。如香柏油，所以叫油浸接物镜，简称油镜。 一般在镜头上有一黑圈或红圈的，表示为油镜物镜，也有的“以 IO”或“HI”字样来表示。由于油镜镜面很小，使用时检视物与镜面又非常靠近（0.14~0.19mm左右），因而使进入镜头的光线较少。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于玻片与物镜之间的介质为空气（接物镜干燥系）。空气折射率为1，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射现象，结果进入物镜的光线必然减少，这样就降低了视野的照明度。若载玻片与物镜之间的介质不是空气，而是一层油质，一般常用香柏油，其折射率为1.515，与玻璃的折射率（1.52）相近。光线通过载玻片可直接通过香柏油进入物镜而几乎不发生折射（接物镜油浸系），使视野增加进光量，这样就能使物像更加清晰， 显微镜的一般使用方法（主要是油镜的使用） 1. 用前检查 从显微镜箱中取出显微镜时，用右手拿镜臂，左手托镜座，直立移动，轻放在平稳的桌面上，检查各部零件是否齐全，镜头是否清洁。 2. 调节光照 正确的照明是获得良好检查效果的前提、用粗调节器提升镜筒，将低倍物镜旋到镜筒下方，使镜头和载物台距离约为5mm左右，左眼看目镜调节反光镜镜面角度（在天然的光线下观察，一般用平面反镜；若以灯光为光源，则一般多用凹面反光镜）。调节光线强弱，然后调节聚光镜的位置（酌予升降），直至视野内得到最均匀最适宜的光度为止。 3. 低倍镜观察 低倍物镜视野面广，焦点深度较深，易于发现目标确定观察位置，故应先用低倍镜观察为宜。 将载片标本（涂面朝上）置于载物台的标本夹上，并将标本部位处于物镜的正下方，转动粗调节器，使镜头下降至镜面距离检视物大约10mm处。然后以左眼看目镜，另一眼睁开，一边观察视野，一边扭动粗调节器使镜头缓慢地升高，至视野内出现物像后，改用细调节器上下微微转动，仔细调节焦距和照明，直至视野内获得清晰的物像，选择适宜部位，移到视野中心，待换中、高倍镜观察。 4. 依次再进行中倍、高倍观察 在物镜依次由低倍至中倍、高倍的观察过程中，应逐次上升聚光镜以调节光线亮度，同样选择适宜的部位移至视野中央。 5. 油镜观察 将聚光镜提升至最高点，转动转换器，移开高倍镜，使高倍镜和油镜成“八”字形，在标本中央滴一小滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，微微转动细调节器，可见清晰物像，如果油镜上升已离开油面还未看清物像的话。需重新调节。此时可从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接。应特别注意不能压在标本上，更不能用力过猛否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。用左手向上转动粗调节器，当视野中有模糊的标本物像时改用细调节器，直到看清物象为止。 6. 换片 另换新的标本片，必须从第三条开始操作。 7. 用后必须清洁、复原 观察完毕，上旋镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少许二甲苯（香柏油溶于二甲苯）擦去镜头上的残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。机械部件用细软布擦去灰尘和冷凝水，下降镜筒，将接物镜转成八字形置于载物台上。下降聚光镜，（切勿使接物镜与聚光镜相碰受损），反光镜垂直于镜座。放进显微镜箱中锁好，并放入指定的面微镜柜中。 显微镜保养和使用中的注意事项 （1）不准擅自拆卸显微镜的任何部件，以免损坏。 （2）镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布擦，以保证镜面的光洁度。 （3）观察标本时，必须依次用低倍镜、中倍镜、高倍镜，最后用油镜、当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可用粗调节器向下旋，以免物镜碰到胶片损伤镜面或压碎玻片。 （4）观察时，两眼睁开养成两眼能够轮换观察的习惯以免眼睛疲劳，并目能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 （5）拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿动。 （6）显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生