实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察.ppt

* * 实验五：线粒体与液泡系的超活染色与观察 一、实验目的： 1、观察动物、植物活细胞内的线粒体、液泡系的形态、数量与分布。 2、了解细胞的超活染色技术。 二、实验原理： 活体染色是使生活有机体的细胞或组织进行特异性着色但对样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，既可以显示生活细胞内的某些特定结构又不会影响细胞的生活状态和造成细胞死亡。通常分为体内活体染色和体外活体染色。体外活体染色又称为超活染色。活体染料主要是靠染料的“电化学”特性。例如碱性燃料就是靠表面带有的阳离子与被染的细胞部分的阴离子相互吸引而着色。詹纳斯绿B和中性红即是最常用的两种。前者是线粒体的专一活性染色剂，线粒体中的氧化酶使染料氧化即有色状态（蓝绿色），而在周围空间中染料仍保持还原即物色状态。中性红对液泡系的染色有专一性，而对核与胞质不着色。 三、实验用品： 1 器材：显微镜，恒温水浴锅，刀片，镊子，载玻片，盖玻片，吸管，吸水纸。 2 试剂： Ringer溶液（NaCl 0.85g，KCl 0.25g，CaCl20.03g，加蒸馏水100ml）； 10%、1/3000中性红溶液： 称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热 (30~40℃)使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存。临用前，取已配制的1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。 1%、1/5000詹纳斯绿B溶液： 称取50mg詹纳斯绿B溶于5ml Ringer溶液中，稍加微热(30~40℃)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为1%原液。取1%原液l ml加入49ml Ringer溶液，即成1/5000工作液装入瓶中备用。最好现用现配。 3 实验材料：人口腔上皮细胞，黄豆根尖。 四、实验方法： 1、人口腔上皮细胞线粒体超活染色与观察 将清洁载玻片放在37度恒温水浴锅的金属板上，滴加2滴1/5000詹纳斯绿B溶液，随后用牙签在口腔颊或者上颚处刮取上皮细胞放在载玻片的染液滴中，并搅动几下。染色处理10-15min后盖上盖玻片进行观察。 2、植物细胞液泡系的超活染色与观察: 取豆芽的根尖0.5cm左右的长度进行纵切，尽量切的很薄，滴加中性红染液，室温染色5-10min，吸去染液加一滴Ringer溶液，盖上盖玻片进行观察。注意此时应该轻压盖片使根尖尽量压扁利于观察。 五、实验结果与作业： 对人口腔上细胞的线粒体活性染色结果绘图 注意： 对黄豆根尖液泡系的染色进行观察时，注意分别对根尖的不同区域进行观察，并对其中的细胞的液泡进行比较。在根尖生长点附近的细胞形状较小排列紧密，其中的液泡被染成红色，数量不只一个且较小；在伸长区的细胞形状逐渐变为长方形，形状较大排列较为规则，其中的液泡也逐渐变少变大，并且颜色也变浅。至成熟区后细胞中只可见一个很大的液泡。 液泡系（vacuolar system）： 在细胞内凡是由膜所包围的小泡和液泡，除线粒体和质体以外都属于液泡系。液泡的来源是多方面的，它们与质膜、内质网、高尔基体有密切关系。在电子显微镜下可明确地看到在细胞内有内质网、高尔基体、核膜等的囊状结构，它们互相吻合，在细胞内构成复杂的网状结构，是内膜所包围的小泡和液泡的统称 线粒体的形态, 大小,数目与分布 形态：线状，颗粒状 大小：长1.5?m-3 ? m; 直径0.5-1.0 ? m。 胰脏外分泌细胞中有长达10~20μm的巨线粒体。 数目：几百到几千（与细胞种类，细胞生理功能和生理状态有关）。 肝细胞约1700个线粒体，占细胞体积的20%； 许多哺乳动物成熟的红细胞无线粒体。 分布：不均匀（与细胞能量需求有关） 线粒体 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色 * *