生物制药复习要点.doc

药物研究与开发的基本过程？ 生物技术制药的定义、分类？ 采用现代生物技术、借助某些微生物、植物、动物生产医药品。 从生物制药的历史与看其发展趋势？ 基因操作技术不断完善；基因工程药物和疫苗研究；新的生物治疗制剂转基因动物和植物； 在农业和畜牧业生产的应用生物体基因组及其编码蛋白质的结构与功能；基因治疗、蛋白质工程、生物信息学。 简述生物药物的定义、来源及特性？ 生物药物的定义：运用生物学、医学、生物化学等研究成果，从生物体、生物组织、细胞、体液等，综合利用物理学、化学、生物化学、生物技术、药学等学科的原理和方法制造的一类用于预防、治疗和诊断的制品。 人体、动物、植物、微生物和各种海洋生物等。 如：免疫法制备的动物原料、基因工程技术制备的微生物或其它细胞原料。 1. 药理学特性 治疗的针对性强，治疗的生理、生化机制合理，疗效可靠。 ⑵ 药理活性高⑶ 毒副作用小，营养价值高 ⑷ 生理副作用常有发生 2.在生产、制备中特殊性 (1)提取纯化工艺复杂（原料中有效物质含量低）(2)稳定性差 (3)易变质腐败(低温、无菌操作) (4)注射用药要求 3.检验上的特殊性 （1）需理化检验指标（2）生物活性指标 基因工程技术生产药物的优点及生产的基本过程？ 优点 1.大量生产难以获得的生理活性蛋白质和多肽 2.提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围 3.发现，挖掘更多的内源性生理活性物质 4.改造和去除内源生理活性物质在作为药物使用存在的不足之处 5.获得新型化合物，扩大药物筛选来源 基本过程 1.获得目的基因 2.组建重组质粒 3.构建基因工程菌(细胞) 4.培养工程菌 5.产物分离纯化 6.除菌过滤 7.半成品检定 8. 9.包装 获得药用目的基因的方法？ 1逆转录法 2逆转录－聚合酶链式反应法 3化学合成法 4筛选基因的新方法 （功能克隆法、构建cDNA文库） 真核基因在大肠杆菌的表达方式？ （1）以融合蛋白的形式表达药物基因：融合蛋白氨基端是原核序列，羧基端是真核序列。优点：操作简便，蛋白质在菌体内比较稳定；易高效表达；但只能做抗原,一般不做人体注射用药 （2）以非融合蛋白的形式表达药物基因：易被蛋白酶破坏；N端有甲硫氨酸，易引起免疫反应 （3）分泌型表达蛋白药物基因：外源基因融合到原核蛋白信号肽序列的下游 影响目的基因在大肠杆菌表达的因素？ (1) 外源基因的拷贝数：高拷贝数的表达质粒 (2) 外源基因的表达效率 ① 启动子的强弱：转录水平的高低 常用强启动子：lac、trp、λPL、tac、bla② 核糖体结合位点的有效性 ③ SDATG的间距：翻译效率 ④ 密码子组成：“偏爱”大肠杆菌 表达体系 产物 产生部位 培养方式 提纯 产物活性 潜在危险 大肠杆菌 多肽、蛋白质或融合蛋白 菌体内 容易 部分可获高产 一般 对原核者好真核者稍差 不大 酵母 多肽、蛋白质或糖基化蛋白 菌体内或分泌出细胞 容易 可高产 菌体内稍复杂 真核的接近天然 不大 哺乳动物细胞 完整糖基化蛋白 分泌出细胞 较难、成本高 可高产 简单 几乎可为天然产物 需注意有致癌因素 提高质粒稳定性的方法？ 1.选择合适的宿主菌2.选择合适的载体3.选择压力 4.分阶段控制培养5.控制培养条件6.固定化 基因工程菌的发酵工艺与传统的微生物发酵工艺有什么异同？ 基因工程菌发酵 传统微生物发酵 生物材料(微生物 带外源基因重组载体 不含外源基因 生产目的 获得大量外源基因表达产物 获得微生物自身基因表达所产生的初级或次级代谢产物 基因工程药物建立分离纯化工艺的依据及分离纯化的基本过程？ 分离依据： 1.含目的产物的起始物料的特点 （1）菌种类型及其代谢特性（2）原材料和培养基的来源及其质量 （3）生产工艺和条件（4）初始物料的物理、化学和生物学特性 2.物料中杂质的种类和性质3.目的产物特性4.产品质量的要求 分离纯化过程： 发酵液 细胞分离 胞内产物 胞外产物 细胞破碎 固液分离 浓缩 初步分离 高度纯化 制剂 产品 包含体 细胞碎片分离 变性 复性 根据药物的不同特性，分离纯化蛋白质药物的常用方法有哪些，简述其原理？ 离子交换色谱 原理:通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的 疏水色谱 原理：根据蛋白质疏水性的差异来分离纯化的 亲和色谱