4高效液相色谱法说课.ppt

商品化的ELSD都是三部分组成，即雾化器、加热漂移管和光散射池。 a: 雾化器与分析柱出口直接相连，柱洗脱液进入雾化器针管，在针的末端，脱洗液和充入的气体（通常为氮气）混合形成均匀的微小液滴，可通过调节气体和流动相的流速来调节雾化器产生的液滴的大小。 b: 漂移管的作用在于使气溶胶中的易挥发组分挥发，流动相中的不挥发成分经过漂移管进入光散射池。 c: 在光散射池中，样品颗粒散射光源发出的光经检测器检测产生光电信号。 ELSD采用的光源 一般为卤素灯 * * ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物: 如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性剂、药物，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。 响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。 ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。 * * 组分进入检测器的入口 a: UV检测的主要缺点在于紫外不吸收的化合物灵敏度很低。ELSD可以检测任何挥发性低于流动相的样品。 b: ELSD的通用性响应值使得ELSD响应值比UV响应值更能代表样品的质量 c: 不同于紫外检测只能使用不吸收紫外的流动相，ELSD能与任何的挥发性流动相相容，不论其光学特性。 * * ? 紫外 示差 荧光 安培 ELSD 类型 选择性 通用型 选择性 选择性 通用型 线性 2.4×104 104 103 104 104 最小检出量（g/ml） 10-６ 10-６ 10-９ 10-１２ 10-８ 能否梯度 能 不能 能 不能 能 对流速 不敏感 不敏感 不敏感 敏感 不敏感 对温度 不敏感 敏感 不敏感 敏感 不敏感 * LC应用 一、定性分析 纯品对照法 光谱检测器定性：IR、NMR、MS 二、定量分析 同GC 9、在高效液相色谱中，下列检测器能适用于梯度洗脱的是( ) A、紫外光度检测器 B、荧光检测器 C、示差折光检测器 D、电导检测器 10、用高效液相色谱法分析维生素，应选用何种检测器较好？( ) A、紫外光度检测器 B、氢焰检测器 C、火焰光度检测器 D、示差折光检测器 14、在高效液相色谱中，通用型检测器是( ) A、紫外光度检测器 B、荧光检测器 C、示差折光检测器 D、电导检测器 AB A C 1. 液相色谱法分类 2. 液相色谱仪器基本构成 3. 高效液相色谱法分析条件的选择 4. 反相键合相色谱法原理及特点 5. 梯度洗脱方法特点 6. 液相色谱定性和定量分析方法 固定相极性流动相极性 正相分配色谱 组分极性越大，保留时间越长 反相分配色谱 固定相极性流动相极性 组分极性越小，保留时间越长 分离强极性物 分离弱、非极性物 ? 流动相的要求： 1、对样品有一定的溶解度。 2、适用于所选的检测器。 3、化学惰性、 4、安全性、 5、低粘度、 6、高纯度。 Φ表示溶剂的体积百分比，P表示溶剂的极性大小。 reversed phase HPLC 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。 1）固定相：极性小的烷基键合相 C8柱，C18柱（ODS柱） 2）流动相：极性大的甲醇-水或乙腈-水 流动相极性 固定相极性 底剂 + 有机调节剂（极性调节剂） 例：水 + 甲醇，乙腈， 3）流动相极性与k的关系： 流动相极性↑，洗脱能力↓，k↑，组分tR↑ 4）出柱顺序： 极性大的组分先出柱，极性小的组分后出柱 5）适用 非极性~中等极性组分（HPLC 80%问题） 当今液相色谱的最主要分离模式，几乎可用于所有能溶于极性或弱极性溶剂中的有机物质的分离。 normal phase HPLC 由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。吸附色谱也属正相HPLC，早期的液相色谱中曾广泛采用这种体系。 1）固定相 极性大的氰基或氨基键合相 2）流动相：极性小 底剂 + 有机极性调节剂 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇 3）流动相极性与k的关系 流动相极性↑，洗脱能力↑，组分tR↓，k↓ 4）出柱顺序 结构相近组分，极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱。 5）适用 分析极性大物质、如糖类等。 对于一些在非极性疏水固定相中强烈保留的有机分子常常采用正相HPLC模式。 非键合相表面 键合相表面 ODC C18 C8 C1 Phenyl