基因的提取纯化与检测.ppt

核酸的结构和功能 核酸是遗传信息传递的载体 核酸的化学组成及结构 核酸的功能 核酸的检测技术 核酸是遗传信息的载体 DNA的空间结构 Tm值与增色效应 变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露，260nm紫外吸收值因而增加，这一现象称为增色效应(hyperchromic effect)。当温度升高到一定范围时，DNA溶液在260nm处的吸光度突然明显上升至最高值，随后即使温度继续升高，其吸光度也无明显变化。通常人们把50％DNA分子发生变性的温度称为变性温度（即熔解曲线中点对应的温度），由于这一现象和结晶的熔解相类似，故又称熔点或熔解温度(meltin temperature，Tm)。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半时的温度。 Tm值和增色效应是目前描述DNA特性所常用的两个量，DNA内G-C配对含量高，其Tm值也高。 基因的转录和加工  DNA功能总结：中心法则 * 核酸在细胞中的分布 真核细胞 原核细胞 plasmid Bacterial chromosome (质粒) DNA的一级结构 磷酸基 脱氧核糖 3，5磷酸二酯键（连接） 5， 3， OH 3 5 碱基 碱基的结构氢键的形成原理 DNA一级结构和二级结构的关系 DNA和RNA的结构差异 主要区别：碱基、核糖 核酸的立体结构及其特征 3， 5， 3， 5， 大沟 大沟 小沟 3.4nm 2nm 核酸的化学检测原理 嘌呤碱与嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，最大吸收值在260nm附近。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光度计加以定量及定性测定。 实验室中最常用的是定量测定小量的DNA或RNA。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出260nm与280nm的OD值，从/的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的/应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，/比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。 通常1OD值相当于50微克／毫升双螺旋DNA，或40微克／毫升单螺旋DNA(或RNA)，或20微克／毫升寡核苷酸计算。 对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。 DNA的变性与复性及其Tm值和cot值测定 DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变(如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等)，称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂(如乙醇，尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化因素的影响，均可使DNA变性。 DNA的Tm值与以下因素有关： (1) DNA的均一性：均一DNA如病毒DNA，解链发生在很窄的范围内，而不均一DNA如动物细胞DNA，Tm值的范围则宽。 (2) DNA分子中（G+C）的含量：一定条件下DNA的Tm值，由G+C含量所决定，因为G+C之间有3个氢链，因此G+C含量较高DNA，Tm值较高，二者的关系可用以上经验表示：(1xssc) ％(G+C) = (Tm一69.3)×2.44 (3) 溶剂的性质：Tm不仅与DNA本身性质有关，而且与溶液的条件有关，通常溶液的离子强度较低时，Tm值较低，熔点范围也较宽，离子强度增高时，Tm值升高，融点范围也变窄。因此，DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般保存在1mol/L NaCl溶液中较稳定。 问题 DNA的光谱吸收有何特点，此特点有何应用？ DNA的稳定性由何决定？ DNA的多样性由何决定？ DNA的特异性由何决定？ DNA的复制及复制的真实性 解链 复制 (2n ) 再螺旋 母链 子链 参与DNA复制的体系 DNA复制的过程 染色体和基因、DNA的关系 内含子和外显子 DNA复制的方式和结果 半保留复制 全保留复制 分散复制 蛋白质的体内合成 DNA RNA (mRNA) protein ? 转录 翻译 基因－mRNA-tRNA-蛋白质的关系 *