第三章蛋白质结构ppt.ppt

（二）不可逆沉淀 定义：在强烈沉淀条件下，不仅破坏了蛋白质胶体溶液的稳定性，而且也破坏了蛋白质的结构和性质，产生的蛋白质沉淀不可能再重新溶解于水。 由于沉淀过程发生了蛋白质的结构和性质的变化，所以又称为变性沉淀。 如加热沉淀（次级键）、强酸碱沉淀（影响电荷）、重金属盐沉淀（Hg2+、 Pb2+ 、Cu2+、 Ag2+）和生物碱试剂或某些酸类沉淀等都属于不可逆沉淀。 4.重金属盐沉淀(条件：pH 稍大于pI为宜) 当pH 稍大于pI时，蛋白质颗粒带负电荷这样就容易与重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。 重金属沉淀法的机理： 重金属盐加入之后，与带负电的羧基结合。 5.加热变性沉淀法 几乎所有的蛋白质都因加热变性而凝固。少量盐促进蛋白质加热凝固。 当蛋白质处于等电点时，加热凝固最完全和最迅速. 如：煮鸡蛋 酶的制备：超氧化物歧化酶的提取 四、蛋白质的变性与复性 A、蛋白质的变性定义 天然蛋白质因受物理、化学因素的影响，使蛋白质分子的构象发生了异常变化，从而导致生物活性的丧失以及物理、化学性质的异常变化。但一级结构未遭破坏，这种现象称为蛋白质的变性。 B、引起蛋白质变性的主要因素： 1.物理因素： 加热、高压、紫外线照射、X-射线、超声波、剧烈振荡和搅拌等 2.化学因素： 强酸、强碱、脲、去污剂（十二烷基硫酸钠（SDS））、重金属盐、三氯醋酸、浓乙醇等。 C、蛋白质的变性后的表现 生物活性丧失；溶解度降低，对于球状蛋白粘度增加；光吸收系数增大；生物化学性质改变。 组分和分子量不变。 D、蛋白质变性的本质： 分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。 变性后的蛋白质在结构上虽有改变，但组成成分和相对分子质量不变。 E、蛋白质的复性 定义：如果引起变性的因素比较温和，蛋白质构象仅仅是有些松散时，当除去变性因素后，可根据热力学原理缓慢地重新自发折叠恢复原来的构象，这种现象称作复性。 核糖核酸酶变性与复性作用 天然状态，有催化活性 非折叠状态，无活性 8 M 尿素 ?-巯基乙醇 变性 天然状态 –S-S-键恢复 而且是正确配对 复性 去除尿素及?-巯基乙醇 蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对蛋白质进行定性定量鉴定。 五、蛋白质的紫外吸收 　 六、蛋白质的颜色反应 双缩脲反应 酚试剂反应 蛋白质定量、定性 茚三酮反应 测定常用方法 另外还有：蛋白黄色反应、米伦氏反应、乙醛酸反应等。 双缩尿在碱性溶液中能与硫酸铜发生反应，产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。 (碱性溶液) Cu2+ 红紫色络合物 180°C 1.双缩脲反应 五、蛋白质的利用 1.在食品方面的利用 牲畜、家禽、鱼的肌肉以及蛋、奶等历来作为美味食物的人类提供大量营养所必需的蛋白质。 “甜味蛋白” 2.在医药方面和利用 如“胰岛素”、“干扰素” 3.在饲料方面的利用 如“叶蛋白” 这种病最早是在非洲发现的！ 这种病人的红细胞在氧不足时变形成镰刀状，故名。 镰刀形贫血病：病人体内血红蛋白的含量乃至红细胞的量都较正常人少，且红细胞的形状为新月形，即镰刀状。此种细胞壁薄，而且脆性大，极易涨破而发生溶血；再者，发生镰变的细胞粘滞加大，易栓塞血管；由于流速较慢，输氧机能降低，使脏器官供血出现障碍，从而引起头昏、胸闷而导致死亡。 病人与正常人相比,在574个氨基酸中只有一个氨基酸不同。 ?-链N端氨基酸排列顺序 1 2 3 4 5 6 7 8 Hb-A（正常人） Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys… Hb-S（患 者） Val-His-Leu-Thr-Pro-Val-Glu-Lys… 　　 * * 三、蛋白质的三级结构 1、?定义 多肽链在二级结构、超二级结构和结构域的基础上，主链构象和侧链构象相互作用，沿三维空间多方向卷曲，进一步盘曲折叠形成特定的球状分子结构。 在三级结构中，具有极性侧链基团的AA残基几乎全部在分子的表面,而非极性残基则被埋于分子内部,不与水接确.而形成疏水的核心。 β-折叠 β-转角 无规则卷曲 空穴 3、三级结构的特征： ?含多种二级结构单元； ?有明显的折叠层次； ?是紧密的球状或椭球状实体；