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6B11-OCIK(6B11minibody-ovary-cytokine-induced-killer cell)治疗卵巢癌的体内外实验研究 北京大学人民医院妇科肿瘤中心 100044 北京 体细胞治疗 体细胞治疗指利用人自体、异体或异种的体细胞，经体外操作后回输人体的治疗方法，已成为一种比较有力的肿瘤生物治疗方案。 SFDA已经批准 北京大学人民医院细胞治疗中心（CIK-白血病、丙型肝炎） 天津肿瘤医院（LAK、TIL、CIK、CTL、干细胞） 曹雪涛教授（DC） 体细胞治疗 树突状细胞（dendritic cell， DC） 最强的抗原呈递细胞 强大的激活CD8+及CD4+T细胞的能力 在免疫应答中处于中心地位。 细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine induced killer cell ，CIK） 人体外周血单个核细胞经体外用多种细胞因子共同培养获得的一群异质细胞。同时具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。 细胞毒T细胞（Cytolytic T cell ，CTL ） 最具特异性杀伤作用的细胞，是过继免疫治疗中的最佳效应细胞。 6B11-OCIK 6B11-OCIK:卵巢癌抗独特型微抗体(6B11minibody)负载DC和多种细胞因子共同激活的淋巴细胞（ 6B11minibody ovary cytokine induced killer cell ,6B11-OCIK), 包括特异CTL和非特异CIK 6B11抗独特型微抗体： 前期工作 前期工作 6B11-OCIK对部分患者（5/9）自体OC166-9表达阳性的肿瘤细胞有特异性杀伤作用 体细胞治疗的安全性? 有效性? 已经通过国家药监局业务评审，正在行政审批 6B11-OCIK的安全性和有效性试验 急性毒性试验 体外致瘤性实验——软琼脂克隆形成 裸鼠体内致瘤性实验 SCID鼠卵巢癌皮下瘤的抑制 6B11-OCIK的急性毒性试验 目的: 体外培养过程、环境因素等对安全的影响 方法: 6B11-OCIK临床人用治疗剂量的1、2.5，10倍（2×108/kg、5×108/kg、2×109/kg）回输BALB/c小鼠 对照: PBMNC 输注后半小时以及连续13天的观察显示：实验各组和对照组动物都无任何明显的异常反应，毛顺、精神活跃饮食正常 ；各组动物体重均增长，分别为：10倍组增长0.99 g，2.5倍组增长0.62 g，1倍组增长0.548 g，对照组增长0.550 g。 输注后第13天处死小鼠，解剖观察各鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、皮肤等主要脏器无明显异常。 6B11-OCIK的急性毒性试验 6B11-OCIK体外致瘤性实验——软琼脂克隆形成 6B11-OCIK、CIK、新鲜单采PBMNC及SKOV3在底层为1.2%、上层为:0.7%的双层琼脂糖培养基中培养10-14天。 培养14天后，显微镜下观察SKOV3细胞克隆形成良好，克隆形成率50％，而6B11-OCIK、CIK及新鲜单采PBMNC始终未形成克隆 6B11-OCIK软琼脂克隆形成试验 6B11-OCIK裸鼠体内致瘤性实验 6B11-OCIK、 CIK和新鲜单采单个核细胞终产品细胞皮下接种裸鼠，以Hela细胞为阳性对照，以WI-38为阴性对照，观察细胞致瘤性。 （参照《新生物制品审批办法》中传代细胞系检定规程）。 皮下接种裸鼠后14天，阳性对照宫颈癌Hela组全部成瘤，6B11-OCIK、CIK、 WI-38组和新鲜PBMNC组持续观察13周没有成瘤。 6B11-OCIK裸鼠体内致瘤性实验 6B11-OCIK对SCID鼠卵巢癌皮下瘤的抑制作用 SkOV3构建SCID小鼠卵巢癌移植瘤模型后，注射6B11-OCIK，并以CIK、PBMNC细胞以及生理盐水作为对照组。 结果显示6B11-OCIK组、CIK组、新鲜PBMNC组和生理盐水组的平均瘤重分别为0.484g、0.576g、0.646g、0.858g。6B11-OCIK组肿瘤重量与生理盐水对照组相比有显著差异（p＝0.023）,与CIK组、新鲜单采组相比无显著性差异（p＝0.540 ；p＝0.285）。 6B11-OCIK对SCID鼠皮下荷瘤的治疗作用 讨 论 由于不能在人体进行实验，急性毒性实验采用了BALB/c小鼠，尽管不能完全排除异种排斥反应，但终产品人6B11-OCIK回输小鼠没有出现明显毒性反应。 体外软琼脂克隆形成实验中，具有体外增殖能力的SKOV3细胞在软琼脂培养中克隆形成良好，表明培养系统可靠，而6B11-OCIK、CIK及PBMNC均未形成克隆，表明6B11-OCIK