免疫方法课程.ppt

免疫分析 基于抗原、抗体的特异性识别，通过对抗原或抗体进行标记(酶、荧光物质、放射性同位素标记等)，利用标记物的信号放大作用,与现代测试技术相结合，对样品中特定的目标物进行定性定量检测。 特点 特异性强、灵敏度高 方便快捷、分析容量大、检测成本低 可提供系列化的产品以及技术，产品可以商业化 抗原抗体的概念 抗原（antigen,Ag）是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，从而引起动物产生抗体或致敏淋巴细胞，并能与相应免疫应答产物即抗体和致敏淋巴细胞发生特异性结合的物质 抗原的两大特性 免疫原性 免疫反应性 抗原抗体的概念 抗体是机体受抗原刺激后，由淋巴细胞特别是浆细胞合成的一类能与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白 多克隆抗体 单克隆抗体 基因工程抗体 检测形式：直接竞争法 适于农、兽药等小分子物质（分子量小于10000） 定量结果 膜载体免疫分析-试纸条 定性检测技术，其特点是以微孔膜作为固相载体。标记物可用酶或各种有色微粒子，定性地判别出样品是否含有某种有害物，含量是否超过规定标准。 试纸条技术 胶体金试纸条检测原理 农药残留快速检测-酶抑制法 GB/T5009.199-2003《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》中的速测卡法（纸片法） 主要用于果、蔬、茶、粮食、水及土壤中有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测 实验部分 猪肉中盐酸克伦特罗的快速测定 牛乳中三聚氰胺的快速测定 白菜中农药残留的快速测定 盐酸克伦特罗快速检测 结果判读 三聚氰胺快速检测 样品处理 生鲜乳及灭菌乳（UHT奶、巴氏奶） 用干燥、洁净的离心管或适当容器盛放样品，先吸取1ml纯净水于离心管中，再吸取1ml液态奶于离心管中，摇匀 测定 用滴管吸取待检样品溶液，垂直滴加3 滴 （100μL）于加样孔中，加样同时开始计时； 5分钟后即可读取结果； 10分钟后结果无效。 *其他样品处理方法 奶粉 用纯净水1:10还原（1份样品+10份纯净水）直接用于检测，溶解奶粉时需用涡旋仪或手动强烈振荡5~10分钟。按照生鲜乳及灭菌乳的处理步骤进行稀释检测。 发酵乳（非凝固型） 用纯净水1:4还原（1份样品+4份纯净水）直接用于检测。 结果判读 【注意事项】 检测卡请在保质期内一次性使用； 使用前将检测卡和待检样本恢复至室温； 请勿触摸检测卡中央的白色膜面； 滴管不可混用，以免交叉污染； 检测时避免阳光直射和电风扇直吹； 请勿使用自来水、纯化水及蒸馏水作为阴性对照； 如果组织出现沉淀或浑浊物，请离心后再检测； 如样品非常粘稠，有可能导致样品不能移动，此时可适当多滴1~2滴液体； 【储存及有效期】 储存温度4～30℃、置于阴凉避光干燥处，切勿冷冻； 产品有效期为12个月； 农兽药快速检测技术 酶标记免疫检测：以酶作为示踪标记物 胶体金标记免疫检测：以胶体金作为 示踪标记物 定性结果 T-检测线 C-质控线 0 μg/kg 1 μg/kg 10 μg/kg 胶体金试纸条检测结果判读及实例 反应原理 显天蓝色为阴性结果，说明不含农药； 显浅蓝色为弱阳性结果，说明农药残留量相对较低； 白色药片与滴样品液之前颜色相同，即仍为白色，为强阳性结果； 对阳性结果的样品，可用其它分析方法进一步确定具体农药品种和含量。 结果判断 注意事项 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少色素的干扰。 每批测定应设一个洗脱液或纯净水的空白对照卡，注意样品放置的时间应与空白对照放置的时间一致才有可比性。空白对照卡不变色的原因可能有：①药片表面缓冲溶液加的太少，特别是夏天时表面不够湿润；②温度太低。 农药速测卡在常温条件下有效期为1年，贮存时要求放在阴凉、干燥和避光处，有条件者放于4℃冰箱中最佳。农药速测卡开封后最好在三天内用完，如一次用不完可存放在干燥器中。 注意事项 产品检测限：1 ppb 样品前处理： 取去脂、绞碎的精肉或内脏等组织样本4克以上，装入离心管中，拧紧管盖（勿让水进入离心管中）； 90℃以上水浴中加热10分钟后（肉熟透），冷却至室温； 取样品渗出液，待测 测定： 将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液，垂直滴加100μL（3滴）于加样孔中，加样后开始计时；5分钟读取结果 阴性（-）：T线比C线显色深或一样深，表示样品中