利用毛细管电泳间接紫外检测测定经高压预处理后鱼虾内聚磷酸盐的含量剖析.ppt

Determination of polyphosphates in fish and shrimp muscles bycapillary electrophoresis with indirect UV detection after phosphatase inhibition using high pressure pretreatment 叶菁 * * 毛细管电泳—间接紫外检测法测定鱼和虾内的聚磷酸盐含量——经高压抑制磷酸酶预处理 前 言 目标物的特征 1 技术现状对比 本方法优越性 本研究的目标 2 3 4 目标物的特征 聚磷酸盐包括：三聚磷酸盐、焦磷酸盐和三偏磷酸盐等。 聚磷酸盐的作用:是法律上允许的食品添加剂,主要用于处理鱼、鱼片、虾和肉制品以便提高其持水性。 聚磷酸盐的危害：过多摄入会造成心脑血管疾病，危害人体健康。 鱼和虾体内含有磷酸酶，会对聚磷酸盐进行水解。 技术现状对比 聚磷酸盐常用鉴定方法：国标法、离子色谱法、毛细管电泳法。 国标法:将多聚磷酸盐酸化消解转化为正磷酸盐，只能测定正磷酸盐含量,误差大。 离子色谱法：操作成本高、试剂消耗多、分析时间长。 本方法优越性 毛细管电泳的优越性：分辨率高、分析时间短、样本容量小、成本低。 高压预处理法的优越性：有效抑制磷酸酶对聚磷酸盐的水解作用，提高测定结果准确性。 3 方法学考察 2 抑制磷酸酶研究 1 分离条件优化 本研究目标 基本条件 毛细管仪类型：安捷伦公司1600A，配紫外二极管阵列检测器，分离用未涂层熔融石英毛细管（总长50cm，有效长度41.5cm）。 电泳条件:分离电压：10kV；电泳温度25±0.15℃；进液量：50mbar，3s；紫外检测波长：254nm。 高压预处理条件：压力：400MPa；时间：10min。 缓冲液的PH 发光团的选择 条件优化 分离条件的优化 确定ATP作为发光基团 缓冲液PH为6.4 抑制磷酸酶研究 HPP法对抑制磷酸酶的作用研究。 小结：HPP法能够有效的抑制磷酸酶对聚磷酸盐的水解，实验时间在1.5h完成导致的10%的误差也在可接受范围内。 方法学考察 线性关系、相关系数、检出限度、重现性研究 小结：线性相关性好，检出限在0.23~0.33mg/L范围内，方法精密度好。 方法学考察 HPP处理后冰冻虾样品内聚磷酸盐的回收率 小结：焦磷酸盐和三聚磷酸盐回收率为较高，验证本方法的精确性。但三偏磷酸盐的回收率较低，这可能是因为在繁琐的预处理过程进行降解化学。 方法学考察 对相关样品进行测定。 小结：进一步验证本方法的可行性和精确性。 结 果 确定缓冲液的配方：含有0.1mmol/L十六烷基三甲基溴化铵、10mmol/L ATP、32mmol/L柠檬酸的16mmol/L磷酸氢二钠缓液冲（pH = 6.4)）。 确定了HPP法的操作条件：在400MPa压力下处理10min。 确定了本方法各种考察数据：最小检出量为0.23–0.33 mg/g-1，最低检定浓度为0.77–1.0 mg/g-1。在添加的样品中回收的聚磷酸盐的范围，分别对应的重复性差范围为1.1%~6.8%。 总结本研究的成果，肯定本方法的优越性。 讨 论 展望HPP在分析会被酶降解目标物领域的发展前景。 * * *