生物制药技术-第四章-抗体制药(4,5,6,7小节)重点.pptx

第四章抗体制药;第四节多功能抗体及其制备;近年来，将噬菌体展示技术应用于scFv筛选，可 直接从杂交瘤和外周血淋巴细胞中提取mRNA，构建单链抗体库，从而更易获得高特异性、高亲和力scFVL将两条不同来源的scFv组合成具有两种不同抗原结合特征的新型抗体即为双特异单链抗体。bisFvs分子仅相当F (ab)大小，由于其具有独特的与两个抗原位点结合的能力，因 此无论是作为导向药物载体，效应细胞识别、连接，还是作为免疫阻断抗体.免疫诊断试剂等，都具有更为广阔的应用前景。目前已在许多领域，尤其是肿瘤的诊断、治疗等方面进行了 bisFvs 的应用尝试。; 1.制备bisFvs的方法;; ③应用亮氨酸拉链、螺旋转角一螺旋等蛋白质结构域将两单链抗体连接起来，Kruif等将 小鼠IgG的飞饺链区和亮氨酸拉链区融合于scFv蛋白，建立r依赖亮氨酸拉链的二聚化设计 方案，可以从噬菌体抗体库筛选出scFv直接克隆入该系统获得工聚化bisFvs。; 2.双链抗体的免疫学特性; 3.应用; (1)在治疗中的应用; (2)在免疫诊断中的应用;二、多功能抗体;;;; 三、抗体融合蛋白;;;;;;;;; 第五节抗体工程;; 一、噬茵体抗体库技术的基本方法; 2.抗体库技术的载体; 3. 淘筛;4.表达与鉴定; 噬菌体抗体库技术的特点;; 三、基因工程抗体的表达; 2真核细胞表达 用于表达基因工程抗体的真核细胞有酵母、昆虫细胞、中同仓鼠卵细胞和真菌等，而且这些 细胞的表达都是分泌型表达。真核细胞表达抗体的方式在病毒病的防治和基因治疗上有重要 价值。 3.转基因植物表达 抗体基因能转人植物中表达，这方面研究较多且潜力较大的是烟草叶中的表达，表达的抗体 称为植物抗体。目前完整的抗体分子、单链抗体和Fab片段均已在烟草叶和拟南芥中得到表达，其产量可达植物叶片总蛋白量的1.3%，其高表达产量使抗体成本大幅度下降，而且转基因 植物表达可使抗体大规模农业化生产。; 4.转基因动物表达; 第六节抗体诊断试剂; 一、血清学鉴定用的抗体试剂;; (1)常用诊断血清的品种和用途;下面是几种主耍的病原茵的诊断血清:;;; (2)诊断血清的制备;;类属凝集素的吸收过程如下将细菌制成300~ 600亿/ml浓度的菌 液，经杀菌后备用。各种不同血消对菌液的质量雯求是有差别的，应根据不同的要求对吸收菌液 作不同的处理，例如行的吸收菌须100℃、加热2 h等。吸收菌使用前须用生理盐水洗涤离心沉 淀二次，以除去其中的甲醛。血清吸收前应测定特异性凝集素效价及类属凝集反应，大量吸收前 可进行小量吸收实验。根据类属凝集反应的强弱，决定吸收商用量，每毫升原血清用量A般不 超过5 000亿个菌。吸收时可用原血液.但大多数用0.01%-0.02%硫柳求生理盐水将血清作 适当稀释，然后与吸收菌(事先离心分得的i显菌体)子百分混合，置37℃， 2~~3 h.并经常摇动，然后 离心沉淀。分离所得血清应与本菌及只他有关的代表菌株做玻片凝集试验，如吸收不完全时，须 再次吸收。 般须吸收数次才能除去交叉凝集素。血清吸收完毕后，用O.01%~O.02%硫柳菜 生理盐水稀释到产品的浓度.然后用免疫苗测定效价，无菌试验合格后一才能分装。; (3)诊断的方法; 2.乙型肝炎病毒表面抗原(HBAg)的反向被动血凝诊断试剂;(1)试剂的制备;(2)RPHA法测定HBsAg 的步骤; 3.妊娠诊断试剂; (1)用胶乳试剂测定HCG的方法; (2)胶乳的致敏方法; 4.抗ABO血型系统血清;二、免疫标记用的抗体试剂; ( 一)夜光抗体诊断试剂; 1.荧光抗体的制备; 2免疫荧光测定方法;;;; (2)间接法;; (二)免疫酶抗体诊断试剂; 2. 酶免疫测定用抗体诊断试剂; ELISA的测定方法可用夹心法、间接法和竞争法测定抗原(或抗体); (2 )常用的酶标抗体的诊断试剂;HAV(甲型肝炎病毒)Ag酶诊断试剂，人胚肺二倍体细胞培养HAV.细胞反复冻融5-6次.超声处理2次，离心取血清作为HAV抗体，用此免疫猴.所得高放价血清（NH4）2SO4盐析后用DEAE纤维素纯化，用过碘酸氧化法标记辣根过氧化物酶，获得酶标 抗HAV抗体。夹心法测定HAV抗原。测定HIV(人免疫缺陷病毒)抗原的酶标抗体试剂， 为诊断HIV感染的第三代:试剂还可用来监测的程、观察药物疗馁。其主要优点是在血清抗体 出现之前，检验出HIV感染者。目前有两种酶免疫测定(EIA)试剂检HlV 抗原。一种是测 定HIV全抗原，另一种是测定HlV中的p24蛋白抗原。后者在实际中应用的比较广泛.灵敏和 方便般采用夹心法测定。多采用商议价人抗HIV抗体(采白JG症状携带在)，或用p24抗原 免疫获得抗血清经纯化后用辣根过氧化物陪标记制备成酶标抗体试剂甲蛋胎白(AFI门酶）抗