实验1-大肠杆菌的培养与分离重点.ppt

一、基础知识： (一)微生物 细菌的外形与大小 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 平板划线的操作 不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 （四）大肠杆菌的划线分离 注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h 1、划线分离法 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一 2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上. 划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？ 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 （五）大肠杆菌分离后保存 1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法 * * 第一部分 :微生物的应用 实验目的: 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作 2.进行大肠杆菌的分离,用固体平板培养基进行细菌的划线培养 3.说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构. 微生物包括哪五类： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 ：是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． (二)细菌的常识 1、结构 2、分裂 3、生殖 4、变异类型 5、在基因工程中的应用 大肠杆菌 大肠杆菌属于杆状菌 图1-1 常见的三种细菌典型形态 A.球菌 B.杆菌 C.弧菌 光能自养型:光合细菌 化能自养型:硝化细菌,铁细菌,硫细菌 大肠杆菌属于异养兼性厌氧菌 细菌的革兰氏染色 革兰氏染色法是一种用于细菌的染色法。此法将细菌分为两类，即革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。所谓革兰氏阳性菌就是用革兰氏染液染色后，再用脱色液处理，细菌仍保留染色液的颜色；革兰氏阴性菌则相反。这两种菌的差别在于细胞壁的成分不同。 大肠杆菌属于革兰氏阴性菌 ☆ 培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 固体培养基和液体培养基、半固体培养基。 1.培养基的类型 (三)细菌的培养 成分区别：琼脂 2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压的要求． 细菌喜荤，霉菌喜素 大肠杆菌配方：酵母提取物???0.25g 蛋白胨???0.5g Nacl???? ????0.5g 琼脂??????? 1g 水:50ml 4.培养基的用途 液体培养基：扩增细菌、工业生产 固体培养基：纯化（分离），鉴定、保藏菌种 ☆ 菌落 液体培养基： 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 ☆ 无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 成功地培养微生物的关键。