实验5培养基的使用特点和微生物接种方法重点.ppt

实验五 微生物接种方法及微生物测量方法 实验目的与要求 （p9/32) 强调无菌操作概念，掌握无菌操作技术 掌握微生物移植、纯化的基本方法 了解不同微生物在同一培养基上的培养特征，及同一微生物在不同培养基上的培养特征 掌握几种常用的鉴别、选择培养基的使用 了解显微测微尺的构造；掌握应用显微测微尺测量微生物细胞大小的方法与技术 组成成分：乳糖、胆盐、柠檬酸铁、柠檬酸纳、煌绿、中性红、硫代硫酸钠等，强选择性抑制大肠杆菌，分离沙门菌 煌绿、胆盐、柠檬酸纳抑制非肠道菌 大肠杆菌分解乳糖而产酸，使胆盐析出，菌落中心浑浊呈深红色，柠檬酸铁可使产生硫化氢的菌落呈黑色 硫代硫酸钠缓和胆盐对沙门氏菌的有害作用，中和煌绿、中性红的毒性，使大肠杆菌的红色菌落更加鲜艳 麦康凯培养基 乳糖、胆盐，弱选择性，中性红,分离肠道致病菌 中性红指示剂 pH感应范围6.8（红色）到8.0（黄色） 分解乳糖产酸，菌落颜色呈红色 沙门氏菌、志贺氏菌不分解乳糖，菌落颜色与培养基相同 胆盐有助于沙门氏菌的生长，抑制其他细菌 常用的选择培养基 沙门菌常用的培养基： 亚硫酸铋琼脂平板(BS): 含有煌绿、柠檬酸铋铵、亚硫酸钠、硫酸亚铁，具有强选择性，分离沙门氏菌 HE（Heetoen)： 柠檬酸铁铵、去氧胆酸盐、硫代硫酸钠、麝香草酚蓝和复红，分离肠道致病菌 三糖铁琼脂或克氏双糖铁 三糖铁琼脂含有乳糖、蔗糖、和葡萄糖，蔗糖：区别普通变形杆菌（＋）、沙门氏菌（-） 克氏双糖铁成分 蛋白胨； 牛肉膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ； 葡萄糖； 氯化钠 ； 柠檬酸铁铵 ；硫代硫酸钠 ； 琼脂 ；酚红为指示剂，黄色为产酸，红色为产碱 观察克氏双糖接种后斜面、底层产酸、产气、产H2S的情况，通常大肠杆菌斜面不产酸、底层产酸产气、不产H2S 微生物大小测量原理（P48） 微生物细胞的大小是其形态特征之一，也是鉴定的依据之一。在研究工作中有时要测定显微镜下微生物细胞的大小，使用工具为显微测微尺。 显微测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺。目镜测微尺是一块可放在目镜内的园形玻片。在玻片中央把5mm长度，刻成100等分的小格，其目镜测微尺经过镜筒光学系统后，其每格尺寸随镜筒长度变化而变化，也随放大倍数而变化，因此必须选定显微镜及放大倍数。然后用已知长度的镜台测微尺来校准，计算出物镜下接目测微尺每小格的长度。然后才可用接目测微尺直接测量标本的长度和宽度。镜台测微尺是一中央部分刻有精确等分线的载玻片，其每格长度为10um，是专用于校正目镜测微尺每格长度的。 操作步骤 1，先将目镜测微尺装入目镜中，方法是：先拨出目镜，旋下目镜上的透镜，然后将目镜测微尺的刻度朝下，旋好目透镜，并装上镜筒。 2，将镜台测微尺放在载物台上，刻度朝上，观察。 3，先低倍再高倍观察，旋转目镜测微尺，使其刻度与镜台测微尺刻度线平行。移动载物台推动器使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的一条刻度线重合，然后于另一端找重合线，计算两端重合线之间目镜测微尺和镜台测微尺各有几格，重复三次，按公式计算出目镜测微尺每格实际长度。 目镜测微尺每格长度（微米）=（镜台测微尺两重合线格数×10 ） /目镜测微尺两重合线格数 4，取出镜台测微尺，取酵母菌悬浮液1滴于载玻片上，盖上盖玻片，放在载物台上，进行测量菌体的大小（测20个菌体，求平均值）。 今天的实验 菌种：大肠杆菌、沙门菌、青霉 采用无菌操作进行移植 学会分区划线 所有平皿和试管必须有标记 18－24小时（真菌下周观察）观察试验结果，描述固体培养和液体培养的细菌培养特征 步骤 两个人为一组，一个接种大肠杆菌，一个接种沙门菌 LB液体移植 普通琼脂：分区划线 麦康凯：分区划线 半固体：穿刺 克氏双糖：先穿刺后接种斜面 真菌（青霉） 接种沙保劳氏培养基 实验报告 作业 1，根据使用显微镜写出： 目镜倍数 ，物镜倍数 ，目镜测微尺两重合刻度 格，镜台测微尺两重合刻度 格，故目镜测微尺每格为 μm。 2．所测菌体，其长度为 μm，宽 μm 。 思考题 1、无菌操作的关键步骤包括有哪些？ 2、大肠杆菌和沙门菌在麦康凯培养基上的菌落特征各是什么？为什么？ 3、分区划线的目的是什么？ 4、接种真菌的培养基有何特殊要求？ 下次实验 请各位同学认真预习以下内容： 微生物的快速生化鉴定 p120 水中大肠菌群的测定 p204 * * 微生物培养 Culture：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体 混合培养物：含有多种微生物的培养物； 纯培养物： 只有一种微生物的培养物； Pure culture 通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果 纯培养技术是进行微生物学研究的基础！ 一、用固体培