实验5细菌培养基的制作重点.ppt

实验五培养基的制作 （一）实验目的要求 1、掌握培养基的制作程序； 2、熟悉常用培养基的种类及用途； 3、掌握培养基的消毒灭菌技术。 （二）培养基的成分、种类和用途 1、培养基的概念：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 2、培养基的营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水 3、培养基的其它成分：凝固剂、抑制剂、指示剂 4、培养基的种类和用途 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板； 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤； 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 （2）按物理性状分类： 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。 （三）实验器材 常用玻璃器材：培养皿、试管、烧杯、三角烧瓶、玻棒等。 培养基的成分：普通琼脂培养基、蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、琼脂粉等。 称量工具：普通天平、电子天平。 灭菌器材：高压蒸汽灭菌锅等。 培养基的制作：无菌室、超净工作台。 （四）实验方法 玻璃器材的清洗 ★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡→清水清洗 ★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷→清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷 ★盛培养基试管和平皿：高压灭菌→趁热倒出→洗涤剂洗刷→清水冲洗； ★吸管：3％来苏浸泡→清水冲洗； ★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡→清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤； ★含油脂的器皿：单独灭菌。 玻璃器皿灭菌前的准备 玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。 灭菌方法：干烤灭菌法 2、培养基制备的一般程序 （1）液体培养基的制作 成分: 牛肉浸膏（0.2g） 蛋白胨（0.5g） 氯化钠（0.25g） 50mldH2O等。 程序： 称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存 要求配置的培养基量（每组） 6人一小组,每组需配培养基: 液体培养基：30ml/2人,溶解,试管6根 半固体培养基：30ml/2人,溶解,试管6根 固体培养基：120ml/2人,溶解, 试管6根制备斜面,余下灭菌后倒平板(6个) （中午1点10分，来几位同学倒平板） 完成实验报告一份 * * （1）按用途分类： 高压蒸汽灭菌锅（121.3 ℃ 15-20min） 干烤箱 用途： 1、适用于玻璃器皿、粉剂等的灭菌； 温度160~170℃，时间2h。 2、用作烘干。 高压蒸汽灭菌后的某些物品如平板的烘干 温度 60 ℃ 超净工作台 1、常用玻璃器材的准备 称量 溶化 分装 灭菌 倒平板 培养基灭菌方法 ★ 基础培养基：121.3℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌 保存 2.半固体培养基：在肉汤中加入0.2%～0.5%的琼脂即成。25ml肉汤中0.1g琼脂粉。 程序：称量；熔化；分装(试管)；灭菌；保存 3.固体培养基： 在肉汤中加入2%～3%的琼脂即成；或直接用营养琼脂粉配置。 平板制作程序：称量3.5g营养琼脂粉配100ml固体培养基。 称量；熔化；分装(三角烧瓶)；灭菌；倒平板；保存 试管斜面制作程序： 称量；熔化；分装(试管)；灭菌；斜置；保存