实验6微生物的计数、大小的测定和酵母菌的死活鉴别重点.ppt

实验6 微生物的计数大小的测定酵母菌的死活鉴别 实 验 目 的 学习并掌握利用显微镜直接计数的基本方法 。 了解并掌握酵母菌的死活鉴别染色的原理和技术 。 了解测微尺的构造和使用，学习并掌握测定微生物细胞大小的方法。 实 验 原 理-美兰染色 1.美兰（氧化型呈蓝色，还原型呈无色），活的酵母菌染色后是透明的，而死的酵母菌则被染成了蓝色。 实 验 原 理-血球计数板计数 2.利用血球计数板，在显微镜下进行计数，换算成单位体积内的微生物总数目。 由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板的构造 每个大方格面积为1mm2 ，高度为0.1mm，所以每个计数室的体积为 0.1x1=0.1mm3 每个小格的体积0.1/400=1/4000mm3 =1/4000,000ml 实 验 原 理-细胞大小测量 微生物细胞大小的测量是在显微镜下用目镜测微尺来进行的。 由于测量的是放大后的图像，故目镜测微尺在不同放大倍率下每格实际代表的长度也随之变化，因此，需用物镜测微尺来校正在不同放大倍率下目镜测微尺每格所代表的实际长度。 物镜测微尺是中央刻有精确刻度的载玻片，一般是将1 mm等分为100格，每格长0.01mm，即10 um，它不直接用于测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺的每格的相对长度。 目镜测微尺每格长度(um)＝ 实 验 材 料 材料：1%酵母菌悬液（市售的干酵母粉）、0.1%的美蓝染色液 工具：显微镜、血球计数板、分类计数器、目镜测微尺，物镜测微尺 、显微镜、载玻片、盖玻片、吸水纸 微生物名称 总菌数 个/ml （三）酵母细胞大小的测定 1 制备菌悬液、染色：同上。 2 制片： 用吸管吸取1滴上述菌悬液滴加到干净的载玻片上，盖上盖玻片（注意一定不要有溢出和产生气泡），将多余菌液用吸水纸吸干。 3 显微镜下观察、测量 在不同倍率下测量菌体的长度和宽度，记录测定值，并计算出酵母的长、宽值。 实验注意事项 1.要正确使用显微镜，光线亮度要调的合适。 2.菌液稀释倍数要合适。用前摇匀，如果浓度过大就再稀释，如果过小再重做。 3.计上不计下，计左不计右。出芽计一半 4.浓度稀释标准：以每小方格内含有5-10个酵母细胞为宜，一般稀释10倍即可。 5.计数室内一定不要有溢出和产生气泡。 6.其他微生物孢子技术与酵母菌类似，基本操作一样。 7.确保血球计数板清洗干净。可以加点酒精清洗。 结果与思考题 使用血球计数板计数时，应注意什么？ 将计数结果填入表格中。 简单说明酵母菌死活染色的原理。 填写实验表一和实验表二，完成酵母菌的大小测定。 * * 有氧化型和还原型两种存在形态.前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值，但死活细胞都计数在内。后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。具有将氧化型美兰还原成还原型的能力.故由于计数室的容积是一定的，所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来 1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上 2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。 3.用同样的方法换成高倍镜进行校正，记录并计算在每种倍率下目镜测微尺每一格所代表的长度。 1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上 2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。 3.用同样的方法换成高倍镜进行校正，记录并计算在每种倍率下目镜测微尺每一格所代表的长度。 1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上 2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。 3.用同样的方法换成高倍镜进行校正，记录并计算在每种倍率下目镜测微尺每一格所代表的长度。 1.将物镜测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上 2.先用低倍镜观察，将目镜测微尺刻度与物镜测微尺的刻度平行。使两尺的第一条刻度线相重合，再寻找两尺的另一条重合的刻度线，分别记录两重合线之间物镜测微尺和目镜测微尺所占的格数，由公式计算出目镜测微尺每格所代表的长度。 3.用同样